[发明专利]治疗腹泻的药物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和医学领域，具体涉及一种治疗腹泻的药物及其制备方法。

背景技术

腹泻病是儿科临床医疗的常见病和多发病。根据世界卫生组织统计，每年约有10亿人患腹泻，其中5亿发生在第三世界。导致每年400-500万小儿死亡。中国预防疫司1988年调查资料显示中国估计每年约有8.63亿人次腹泻(包括成人和儿童)，其中5岁以下小儿发病率平均为2.5次/人，推算5岁以下小儿每年有2.945亿人次患腹泻，可见危害之大。该病治疗的药物品种虽多，但主要局限于抗生素杀菌，减少肠蠕动，调节肠道微生态或被动补液等，这些治疗虽解决了部分患者腹泻的症状，但仍有相当一部分患儿因为肠道粘膜不能及时修复，腹泻迁延甚至转为慢性，导致严重的营养不良，生长障碍或丧失劳动力。ITF的发现，为临床诊断、治疗腹泻病提供了一个全新的概念。

整个胃肠道总是不断受到种种物理、化学因素(如食物、胃酸、消化酶、药物、细菌毒素等)的侵害，在生理条件下，胃肠道的自身防御机制使其能够在消化食物的同时避免自身被消化，这需要有一套有效的机制来保护和及时修复粘膜层。如果侵袭因素和防御因素之间失平衡，就会损伤肠道粘膜，发生一系列的病理变化，导致腹泻、炎症性肠病等胃肠疾病的发生。在急性粘膜损伤后，粘膜屏障被破坏，机体需要快速修复来保护粘膜下组织免于被消化酶和胃酸消化。早期修复有助于限制液体流动、电解质丢失，以及防止胃肠道腔内的外部抗原弥散入局部或全身而引起免疫反应。已有资料显示粘膜上皮的早期修复主要是通过细胞迁移来完成的，即损伤区域周边的细胞迁移到剥露区，重建上皮的完整性和重组粘膜屏障。但是肠道粘膜损伤和早期细胞迁移修复肠粘膜的机制仍不清楚。

小肠三叶因子(intestinal trefoil factor，ITF)是一个具有特定三叶结构的胃肠肽，与胃肠道粘膜的早期修复有关。ITF结构稳定、紧密，使之具有不被多种消化酶破坏的生物学特性，因而在消化道腔内ITF能保持结构及功能上的完整。生理情况下，ITF主要由肠粘膜的杯状细胞分泌进入肠腔内。

在胃炎、肠炎、消化性溃疡、炎症性肠病等疾病时，ITF的表达量显著升高。值得注意的是，ITF在胃肠道粘膜损伤后表达量快速升高，因此，有学者设想其可能参与损伤粘膜的早期修复。

近年研究证实，ITF有预防性保护胃肠道粘膜以及促进粘膜损伤后修复的作用。口服和皮下注射ITF能预防和治疗吲哚美辛、乙醇和消炎痛引起的大鼠胃溃疡，使大鼠溃疡指数不同程度地下降。对于体外培养的单层结肠细胞，ITF对肠上皮的屏障功能保护作用明显，细胞损伤减轻。在上皮细胞修复的体外模型中，给予ITF后，迁移到损伤处的上皮细胞增加3～6倍。ITF基因剔除小鼠生长正常，无腹泻和便血，粘膜结构正常，但表皮细胞移动减慢。

缺失ITF基因的小鼠饮用硫酸葡聚糖钠水溶液后，50％的小鼠因大面积结肠炎出现腹泻和便血而死。将重组ITF经口灌胃给缺失ITF基因的小鼠后，能够恢复正常的粘膜修复功能。

研究证实ITF具有“运动因子”的作用，在溃疡修复时促进受损区域上皮细胞重建并加快上皮细胞移行速度，有助于维持粘膜的完整性。利用大鼠小肠表皮细胞系IEC-6单层细胞用刀片刮伤作为细胞培养修复模型，加入ITF后能提高损伤细胞的修复，促进细胞向损伤边缘移动。

因此，ITF表达水平的变化可能是肠炎发生和早期修复的机制之一，目前国内尚无ITF在肠炎模型中促进肠粘膜修复作用的研究。由于ITF在组织中含量极低，因此直接分离天然ITF用于结构和功能研究十分困难。并且，如果能对ITF在肠粘膜损伤及早期修复中的作用有比较深入的认识，则有益于临床诊断、治疗腹泻病、炎症性肠病、消化性溃疡等疾病。尤其对于儿科常见的腹泻病，ITF将成为新的有效诊断、治疗手段，有较大的临床应用价值。

因此，本领域迫切需要开发一种获得高活性的hITF的技术，以生产出大量具有活性的hITF，以便于进一步的深入研究hITF或用于临床用药。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人人小肠三叶因子蛋白的用途，用于制备治疗腹泻的药物。

本发明的另一目的在于提供一种制备人人小肠三叶因子蛋白的方法，通过所述的方法可以获得高活性的人小肠三叶因子蛋白，并且成本低廉。

本发明的另一目的在于提供一种纯化人小肠三叶因子蛋白的方法，所述纯化方法成本低廉，且纯化得率很高。

在本发明的第一方面，提供一种制备人小肠三叶因子蛋白的方法，包括以下步骤：