[发明专利]一种高通量筛选能分泌有活性脂肪酶的工程菌的方法无效
| 申请号： | 200610029324.3 | 申请日： | 2006-07-25 |
| 公开（公告）号： | CN101113464A | 公开（公告）日： | 2008-01-30 |
| 发明（设计）人： | 刘美云;龚毅;魏东芝 | 申请（专利权）人： | 上海中科伍佰豪生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/04 | 分类号： | C12Q1/04 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 | 代理人： | 徐迅 |
| 地址： | 20023*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 通量 筛选 分泌 活性 脂肪酶 工程 方法 | ||
1.一种筛选可溶或分泌表达脂肪酶的工程菌的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：
(1)在培养基上培养脂肪酶基因表达菌，所述的脂肪酶表达菌中转化有含脂肪酶基因表达盒的表达载体，使所述的脂肪酶表达菌表达脂肪酶；和
(2)将对硝基苯酚脂肪酸酯施加于培养基上，观察培养基上的菌落颜色，菌落颜色变黄的为可表达脂肪酶的菌株。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的培养基为固体培养基，其在凝固前的pH值为7.5-9.0。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的培养基为MM固体培养基，并且其中含有PH 7.5-9.0的磷酸盐缓冲液。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的对硝基苯酚脂肪酸酯选自：碳链长为C2-C18脂肪酸的对硝基苯酚酯的一种或几种。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)和(2)之间，还包括步骤：将生长有所述的表达菌的培养基在40-75℃的温度下放置0.5-6小时。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的表达菌选自：酵母、细菌。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的表达菌为酵母。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的表达载体为酵母表达载体。
9.一种培养基，其特征在于，所述的培养基为MM固体培养基，并且其中含有PH 7.5-9.0的磷酸盐缓冲液。
10.如权利要求9所述的培养基，其特征在于，所述的培养基含有：
1.3-1.5％YNB，0.5-1％甲醇，80-120mM PH 7.5-9.0的磷酸盐缓冲液，1.5-2％琼脂。
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