[发明专利]检测高危型人乳头瘤病毒的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种使用实时荧光定量聚合酶链反应技术定量检测样品中常见高危型HPV病毒存在的方法，该方法包括：(1)提供包括HPV病毒基因组核酸的样品、核酸扩增体系，和荧光监测体系的反应与检测混合物，(2)通过扩增反应循环扩增所说的靶多聚核苷酸，(3)使所说的荧光发生基团与被扩增的靶多聚核苷酸间接结合，(4)确定荧光发生基团所产生的荧光量，并结合定量标准曲线确定靶多聚核苷酸的存在及其相对量；其中核酸扩增体系包括可与靶多聚核苷酸结合的寡核苷酸引物，并且荧光检测体系包括可与靶多聚核苷酸结合的寡核苷酸探针；特征在于所说的扩增反应中所使用的正向和反向寡核苷酸引物分别是5’-ttg atg aaaatg gca atc c-3’(SEQ ID NO：1)、5’-gac aaa aac gga aat cca gt-3’(SEQID NO：2)、5’-cat cgg tgt ctg cat ctt c-3’(SEQ ID NO：3)和5’-cat cgtttt cct tgt cct c-3’(SEQ ID NO：4)，并且所使用的寡核苷酸探针是5’-accatg tcc ttt caa aaa aac att tc-3’(SEQ ID NO：5)和5’-acc acg tcc ttgaga aaa agg att-3’(SEQ ID NO：6)。

2.根据权利要求1的方法，其中所说的核酸扩增体系包括(a)耐热DNA聚合酶、(b)2’-脱氧核苷三磷酸、(c)能够与双链靶多聚核苷酸的第一条链结合的正向引物，和(d)能够与双链靶多聚核苷酸的第二条链结合的反向引物。

3.根据权利要求1的方法，其中所说的荧光检测体系包括能够与靶多聚核苷酸结合并且两末端分别结合有荧光发生基团和荧光淬灭基团的寡核苷酸探针。

4.根据权利要求1的方法，所说的方法进一步包括：(1)确定样品中的靶多聚核苷酸经扩增后所产生的荧光达到基线以上的固定阈值时所需的阈循环次数；(2)将已确定的样品中靶多聚核苷酸的阈循环次数与标准溶液中已知量靶多聚核苷酸的阈循环次数相比较，以计算出样品中靶多聚核苷酸的量。

5.根据权利要求1的方法，其中所说的高危型HPV病毒是中国人群中常见的宫颈癌相关人乳头瘤病毒。

6.根据权利要求1的方法，其中所说的高危型人乳头瘤病毒选自16、18、31、33、35、39、45、52、58、59和67型人乳头瘤病毒。

7.根据权利要求1的方法，其中所说的靶多聚核苷酸来自中国人群中常见的高危型人乳头瘤病毒。

8.使用实时荧光定量聚合酶链反应技术定量检测临床样品中高危型人乳头瘤病毒的试剂盒，该试剂盒包括：(1)分别装有浓缩液、DNA提取液、纯水、扩增反应液、稀释液、阴性对照样品、强阳性标准品和加盖密封的多个试剂瓶或管，和(2)分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒，特征在于其中用于靶多聚核苷酸扩增体系的正向和反向引物分别是5’-ttg atg aaa atg gca atc c-3’，5’-gac aaa aac gga aat cca gt-3’，5’-cat cgg tgt ctg cat cttc-3’，5’-cat cgt ttt cct tgt cct c-3；其中用于靶多聚核苷酸扩增和监测体系的寡核苷酸是5’-acc atg tcc ttt caa aaa aac att tc-3’和5’-acc acg tcc ttg aga aaa agg att-3’。