[发明专利]鸡新城疫、传染性支气管炎二联灭活疫苗的制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及禽用生物药剂，一种鸡新城疫、传染性支气管炎二联灭活疫苗的制备方法。

背景技术：

预防和控制传染病的发生对现代养禽业具有非常重要的意义。目前，一般采用的方法主要是加强卫生和消毒，但仅靠这些并不能使现代养禽业集约化大规模生产抵抗得住传染病的传播，给养禽业造成很大的损失的事是经常的事；事实证明，养禽业控制其传染性疾病最主要的手段应该是以预防为主，而接种疫苗被认为是最行之有效的措施。

疫苗是将病原微生物(如细菌、立克次氏体、病毒等)及其代谢产物，经过人工减毒、灭活或利用基因工程等方法制成的用于预防传染病的自动免疫制剂。疫苗保留了病原菌刺激动物体免疫系统的特性。当动物体接触到这种不具伤害力的病原菌后，免疫系统便会产生一定的保护物质，如免疫激素、活性生理物质、特殊抗体等；当动物再次接触到这种病原菌时，动物体的免疫系统便会依循其原有的记忆，制造更多的保护物质来阻止病原菌的伤害。灭活疫苗俗称“死疫苗”，是将病原微生物灭活后使其失去致病能力但仍保留免疫原性而制成的，进入机体后可直接引起免疫应答，但不能繁殖，比较安全、稳定。具有生产方便，使用安全，易于保存的特点。

鸡新城疫俗称“鸡瘟”，是由鸡新城疫病毒引起的一种高度接触性传染病。主要经呼吸道和消化道感染，各种年龄的鸡均可感染，以雏鸡最为严重发病率和死亡率可达80％以上。鸡传染性支气管炎是由传染性支气管炎病毒引起鸡的一种急性、高度接触性呼吸道疾病，传播途径主要是经呼吸道感染；发病多集中在冬、春季；6周龄死亡率高，可达20％左右。

目前，浓缩可提高免疫抗原在疫苗终产品的浓度，常用的浓缩方法有离心沉淀法、氢氧化铝吸附沉淀法和羧甲基纤维沉淀法，但上述几种方法均有其缺点，浓缩可提高免疫抗原在疫苗终产品的浓度，常用的浓缩方法有离心沉淀法、氢氧化铝吸附沉淀法和羧甲基纤维沉淀法，但上述几种方法均有其缺点，本公司经过长期实验采用纤维膜超滤浓缩法，本方法可使效价提高.

现在的制备方法中，灭活是指破坏微生物的生物学活性、繁殖能力及致病性，但尽可能地不影响或少影响其免疫原性。灭活的方法包括物理方法和化学方法。物理法如加热、射线照射等方法，化学法是用化学灭活剂进行的，是目前常用的灭活方法。常用的灭活剂有甲醛、乙酰乙烯基亚胺、乙烯亚胺、β-丙酸内酯等。甲醛的灭活原理是它能使微生物的蛋白质、核酸变性，导致死亡，但不明显影响其免疫原性

现在的制备方法中，佐剂的类型一般由氢氧化铝胶、弗氏佐剂、白油佐剂、矿物油、水花生油乳剂、吐温-80、司盘、左旋咪唑、脂质体等，与抗原混合成悬浊状态，尽可能延长在注射部位的贮留时间，从而持续不断地刺激机体免疫系统，以产生较强的免疫应答；可出现免疫增强的作用。

发明内容：

为了解决鸡新城疫与传染性支气管炎严重影响养禽业尤其是鸡的呼吸道传染性疾病的问题，本发明的目的是提供一种鸡新城疫、传染性支气管炎二联灭活疫苗的制备方法，使其可有效地防止这两种禽病的发生，具有生产方便，使用安全，易于保存的优点。

该鸡新城疫、传染性支气管炎二联灭活疫苗的制备方法，主要提出了新城疫与传染性支气管炎二联灭活疫苗的组和，采用NDVLaSota株病毒液，含重量比：10～22％，IBVM41株病毒液，含重量比：10～22％；分别浓缩、灭活；再加入佐剂白油，免疫助剂吐温、司本、硬脂酸铝制成联苗。

该鸡新城疫、传染性支气管炎二联灭活疫苗的制备方法，生产用毒种的制备，NDV La Sota株和IBV M₄₁株毒种分别适当稀释，分别接种SPF鸡胚，孵育，收获；制苗用病毒液的制备，NDV La Sota株和IBV M₄₁株毒种分别适当稀释，分别接种易感鸡胚，孵育；收活毒种：分别浓缩、灭活.取制苗用NDV La Sota毒株液15％和IBV M₄₁毒株液15％加吐温-80制成水相.用白油、司本-80、硬脂酸铝制成油相.水相与油相之比为1∶1.5一起乳化，分装，帖签，装箱，入库。