[发明专利]一种制备双功能抗体的方法

说明书

技术领域

本技术涉及双功能抗体的制备方法，特别涉及免疫学中可携带用于治疗小分子的药物，同时也具有定向功能的双功能单克隆抗体制备方法。

技术背景

免疫学中的抗体具有特异性，能特异性地识别目标抗原。随着杂交瘤技术的发展，人们很容易地就可以通过常规的免疫杂交瘤技术已经获得了大量的特异性的单克隆抗体，尤其是特异性的抗肿瘤的单克隆抗体的获得使单克隆抗体对肿瘤的诊断与医治起着非常重要的作用.然而由于单克隆抗体多数是鼠源抗体，因而必然存在异源性问题，也必然引起免疫的排斥反应.并且鼠源性抗体对激发人细胞免疫活力方面的作用也是有限的。

后来人们又发明了免疫毒素或放射免疫治疗技术，将毒蛋白或放射性同位与特异性的单克隆抗体通过共价偶联，制备出毒素与单克隆抗体的化学偶联物，由于单克隆抗体的导向作用，从而将毒蛋白或放射性同位带到靶细胞处，再利用毒蛋白毒性或放射性同位素射线将靶细胞杀死.这种免疫毒素或放射免疫技术，虽然对靶细胞有一定杀伤作用，但是同时毒蛋白质分子本身就是异源物质，是很好的免疫原，在免疫毒素发挥一段时间作用之后，机体产生抗毒蛋白的抗体，其治疗效果将大打折扣.再说放射免疫因同位素的污染性较强，对机体及环境都是有很大的危害，从而也限制了放射免疫技术的应用.

现实生活中许多化疗所涉及的化学药物虽然对癌症细胞具有极大的杀伤作用，但是由于化疗或放疗过程中药物的负作用很大，使得正常细胞在治疗期间也同时得到极大的伤害，这主要是由于正常组织细胞所能承受的药物浓度与肿瘤细胞治疗所用的浓度很接近，虽然杀死了肿瘤细胞，但同时也对正常细胞产生极大的杀伤，以至于许多放疗以及化疗患者都出现脱发、病体虚弱等现象。

于是人们想到了双功能抗体，希望抗体既具有特异性识别功能，同时也具有治疗功能.现在双功能抗体，多数集中在抗肿瘤特异性的抗体获得后，再通过诱导剂诱导杂交瘤，获得营养缺陷型的肿瘤细胞，再与抗第二种抗原的脾细胞进行细胞融合，并且第二种抗原通常是治疗中相关蛋白，这种双功能抗体研究与开发周期较长，并且双功能抗体自身也存在稳定性的问题，在实际中治疗效果存在不足.

人们急需要一种双功能抗体，用于治疗，并且研发周期长相对较短，稳定性好，治疗效果强，并且毒性与负作用小的双功能抗体.

虽然制备这种双功能抗体构思本人在数年前就已经形成，但苦于资金等条件所限而未能实施，并且为了筹款本人在其他方面也投入了许多精力。现将相关制备方法公开以便人们能从根本上解决医学上的难题，并且对其他疾病治疗带来启发.

发明内容

一种制备双功能抗体的方法，其内容是：将小分子药物作为半抗原与以特异性抗原作为载体蛋白进行化学偶联，其中治疗药物是小分子化合物，具有一定的化学结合为半抗原，而特异性抗原是大分子物质，直接用作载体蛋白；通过常规的化学偶联制备形成小分子药物与特异蛋白的偶联物，将其偶联物作为免疫原，免疫动物，然而取其脾细胞与相应的骨髓瘤细胞进行细胞融合，在HAT选择培养基的筛选下，只能融合细胞才能存活生长，再经过ELISA筛选出，抗药物小分子的单克隆抗体，所用筛选抗原为小分子药物与另一种蛋白载体的化学偶联物，这样可得到抗小分子药物的单克隆抗体，同时这种单克隆抗体对载体蛋白也呈阳性反应，再从这些阳性杂交瘤中筛选出针对特异性的载体抗原也具有良好的特异性的单克隆抗体。这样就得到抗药物小分子的特异性的单克隆抗体，而同时这个特异性的单克隆抗体对免疫原中的载体蛋白成分即特异性的病原抗原也具有良好的抗原抗体反应能力，即所获得具有双功能特点的单克隆抗体！

本发明建立在一些常规的免疫学理论或技术的基础上，同时本人依据相关的免疫技术进而提出“定向免疫治疗论点”，该论点的基本内容是：

1、小分子化学药物与以病原的特异性抗原作载体能通过化学偶联的方法形成的半抗原-载体蛋白复合物，该复合物依然具有良好的免疫原

2、所得到的半抗原-病原特异性抗原的复合物可以诱发机体，产生抗小分子药物、同时也抗病原特异性抗原的双功能抗体

3、所产生的双功能抗体，能与自由的半抗原小分子药物通过非共价键的方式进行结合，同时也能通过非共价键的方式与肿瘤特异性抗原进行抗原-抗体亲和结合

4、该类双功能抗体能与半抗原药物预先结合，并且半抗原结合后，依然能与特定病原中的特异性抗原结合，从而从药物分子带到病灶处，由于半抗原药物分子与抗体结合是非共价键，这种结合是可逆反应的，因而小分子药物可以从抗体中脱落