[发明专利]一种植物超氧化物歧化酶的制备方法

权利要求书

1.一种植物超氧化物岐化酶的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将洗净的豆粕、龙葵、白英、筋骨草、蛇莓分别粉碎、打浆；

(2)合并步骤(1)中的打浆后的产物，添加重量3～4倍于合并后产物、质量百分比为0.5～2％的碱离子液，厌氧发酵1～12个月；

(3)发酵完后，添加饱和缓冲液，直至pH值为7～8，厌氧静置4～6小时；

(4)添加氧化剂和萃取剂到发酵容器中，脱水沉淀，过滤，取滤液，添加脱水氧化剂，在-10～0℃下，厌氧真空冷冻1～4小时，上述氧化剂添加的量为步骤(3)中溶液体积的1～100％，上述萃取剂添加的量为步骤(3)中溶液体积的15～80％，上述脱水氧化剂添加的量为步骤(3)中溶液体积的15～80％；

(5)沉淀得到粗品酶，采用80～400目滤布抽滤，接着离心分离，取沉淀物，于-30～0℃真空冷冻干燥8～72小时；

(6)将重量40～60倍于步骤(5)中产物、质量百分比为10～15％的还原糖培养基添加到上述产物，再添加重量0.2～0.3倍于还原糖培养基、质量百分比为1.5～3％的掩蔽剂，在78～90℃条件下温浴，温浴产物温度至65～75℃，取出；

(7)在10～20分钟内，冷却至16～20℃，采用400～600目滤布抽滤；

(8)取滤液，添加脱水氧化剂，厌氧静置2～4小时，抽滤、离心分离，得到产物，于-30～0℃真空机冷冻干燥24～72小时，再经常温真空器干燥24～72小时，即得超氧化物岐化酶，上述脱水氧化剂添加的量为步骤(7)中抽滤后溶液体积的15～80％，

其中步骤(1)中各原料之间的质量比为1～100∶1～100∶1～100∶1～100∶1～100。

2.根据权利要求1所述的植物超氧化物岐化酶的制备方法，其特征在于所述步骤(1)中的原料还包括白花蛇舌草和半枝莲，且各物质之间的质量比为1～100∶1～100∶1～100∶1～100∶1～100∶1～100∶1～100。

3.根据权利要求2所述的植物超氧化物岐化酶的制备方法，其特征在于所述步骤(1)中的原料还包括鸭跖草、葎草和鱼腥草，且各物质之间的质量比为1～100∶1～100∶1～100∶1～100∶1～100∶1～100∶1～100∶1～100∶1～100∶1～100。

4.根据权利要求1至3任一所述的植物超氧化物岐化酶的制备方法，其特征在于所述步骤(2)中的碱离子液采用氢氧化钠溶液、氯化钾溶液或氯化钠溶液，步骤(3)中的缓冲液采用柠檬酸、柠檬酸钠、醋酸、醋酸钠、磷酸二氢钾或氯化钠溶液，步骤(4)中的氧化剂采用100％乙醇、质量百分比为1～20％的氢氧化钠溶液、质量百分比为10～40％的双氧水、质量百分比为5～38％的盐酸或质量百分比为10～98％的硫酸，萃取剂采用丙酮、二氯甲烷或三氯甲烷，步骤(4)中的脱水氧化剂采用乙醇、三氯甲烷、丙酮、二氯甲烷或硫酸钠溶液，步骤(6)中的还原糖培养基采用麦芽糖培养基或葡聚糖培养基，步骤(6)中的掩蔽剂采用EDTA溶液、聚乙二醇或上述两种的混合物，步骤(8)中的脱水氧化剂采用100％乙醇、质量百分比为1～20％的氢氧化钠溶液、质量百分比为10～40％的双氧水、质量百分比为5～38％的盐酸或质量百分比为10～98％的硫酸。

5.根据权利要求1至3任一所述的植物超氧化物岐化酶的制备方法，其特征在于所述步骤(2)中厌氧发酵前添加质量百分比为20～100％的步骤(4)中过滤后的沉淀物。

6.根据权利要求1至3任一所述的植物超氧化物岐化酶的制备方法，其特征在于所述的步骤(6)中在温浴之前添加步骤(6)中抽滤后的上层物质，且该上层物质抽滤后添加前经过-20～-10℃冷冻干燥，该上层物质添加的量为步骤(1)中产物合并后混合物质量的10～50％。