[发明专利]瓜类细菌性果实腐斑病免疫磁珠及制备方法

权利要求书

1、一种瓜类细菌性果实腐斑病免疫磁珠及制备方法，其特征在于，

1)、制备BFB免疫抗体；

将标准的BFB病原扩大培养及收集菌体，超声波破碎提取菌体蛋白，制成佐剂BFB抗原，免疫家兔，待效价达到1∶64，放血获得抗BFB血清，用硫酸铵盐析，FpLc蛋白酶A柱纯化得到BFB抗体IgG；

2)、制作BFB免疫磁珠；

将上述BFB抗体IgG，与固相载体相偶联后即为BFB免疫磁珠，制作路线如下：

(1)、选择不溶于水的惰性物作为固相载体；

(2)、固相载体与离子交换基团交链，形成离子交换固相载体。；

(3)、通过离子交换活化固相载体，使其带有大量可交换的负离子；

(4)、活化离子交换固相载体与BFB免疫抗体交链。

2、如权利要求1所述的瓜类细菌性果实腐斑病免疫磁珠及制备方法，其特征在于，固相载体的选择，这种载体为多糖聚合物。

3、如权利要求2所述的瓜类细菌性果实腐斑病免疫磁珠及制备方法，其特征在于，固相载体选择Sephadex。

4、如权利要求2所述的瓜类细菌性果实腐斑病免疫磁珠及制备方法，其特征在于，固相载体选择Cellulose。

5、如权利要求2所述的瓜类细菌性果实腐斑病免疫磁珠及制备方法，其特征在于，固相载体选择Sephadex-agrose。

6、如权利要求1所述的瓜类细菌性果实腐斑病免疫磁珠及制备方法，其特征在于，固相载体与离子交换基团二乙基氨基乙基交链，形成离子交换固相载体，反应如下：

7、如权利要求1所述的瓜类细菌性果实腐斑病免疫磁珠及制备方法，其特征在于，离子交换固相载体的活化，

8、如权利要求1所述的瓜类细菌性果实腐斑病免疫磁珠及制备方法，其特征在于，活化离子交换固相载体与BFB抗体交链得到BFB免疫磁珠，

9、如权利要求1所述的瓜类细菌性果实腐斑病免疫磁珠及制备方法，其特征在于，1)、将标准的BFB病原扩大培养及收集菌体，超声波峰提取菌体蛋白，制成佐剂BFB抗原，免疫家兔，待效价达到1∶64，放血获得抗BFB血清，用硫酸铵盐析，FpLc蛋白酶A柱纯化得到BFB抗体IgG；2)、取带有阴离子交换基因固体载体Sephadex或Cellulose等5克，加入无菌水250ml，过夜，充分溶胀；3)、将上述胶1ml装入小层析柱中，用pH6.8，0.01mol/L的TB含0.4mol/L NaCl洗脱10ml，之后改用pH6.8，0.01mol/L TB液平衡洗脱20ml；4)、取纯化的含蛋白量5mg的BFB抗体0.5ml，加入上述小层析柱中，待BFB免体进入柱床后，此时BFB病原菌特异地被载体上的BFB抗体吸附，而后改用pH6.8，0.01mol/L TB洗脱约10ml，至洗脱液中无蛋白质为止；层析柱中的胶即为含BFB抗体IgG的BFB免疫磁珠；取出后悬浮5ml pH6.8，0.01mol/L TB中，置4℃保存备用。