[发明专利]重组人酸性成纤维细胞生长因子温敏型凝胶剂及其制备方法

说明书

技术领域：

本发明属药物制剂领域，涉及一种治疗烧伤、烫伤和溃疡等带来的创面损伤的重组人酸性成纤维细胞生长因子(以下简称rh-aFGF)温敏型凝胶剂，本发明还涉及该温敏型凝胶剂的制备方法。

背景技术：

酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)是第二个被分离纯化的FGFs家族成员，Thomas于1984年从牛脑中分离纯化得到一由两种大小的多肽(140aa和134aa)组成的混合物，它是一种广谱促分裂原，与从牛垂体中分离到的阳离子多肽碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)有55％的氨基酸序列相同。aFGF主要分布于脑、垂体、神经组织、视网膜、肾上腺、心脏和骨等器官或组织内，在其它组织中含量很少。人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)是一类对来源于中胚层和神经外胚层的多种类型的细胞具有广泛的生物学活性的细胞生长因子。近十多年来的研究表明，该因子可促进血管生成、创伤愈合、骨骼修复、溃疡愈合、眼晶状体再生、神经组织修复、神经突起的生长以及胚胎的发育与分化。

以重组DNA技术生产aFGF的方法已有许多文献报导(如Biotechnologys：960，1987；J.Biol.Chem.263：16471，1988；EP 0219052等)。近年来，为了进一步改善aFGF的生物学活性、提高产物的表达效率及增加表达产物的稳定性，一些实验室已构建了许多改良的重组表达系统(如参见WO 96/08572、WO 98/32869、EP 406738等)。另一方面，一些专利申请还公开了具有提高的生物学活性和/或稳定性的aFGF类似物或突变体(如参见WO96/22369、WO92/11366、WO91/11459)。当前的技术主要是使用细菌特别是大肠杆菌作为以重组技术工业规模生产蛋白质的宿主细胞。中国发明专利《分泌表达酸性成纤维细胞生长因子的方法》(专利申请号：00114010.8)构建了一种在大肠杆菌中分泌表达aFGF的重组表达载体，以生产可溶性酸性成纤维细胞生长因子蛋白。本发明优选此方法生产的aFGF作为本凝胶剂的原料。

创伤愈合在临床上经常遇到的难题是，烧伤等开放性创伤、溃疡、褥疮、糖尿病或感染等原因常会造成创面愈合障碍。因此，如何缩短治疗时间、提高愈合质量是目前临床上待解决的课题。研究证实，haFGF可促进各种组织损伤的修复，改善伤口的愈合。由于创面是细菌等微生物繁殖的温床，创面自身及细菌等微生物的分泌物使创面这一微环境呈酸性，haFGF在这一微环境中较bFGF稳定，更有利于发挥其生物学活性。此外，与表皮生长因子(EGF)相比较，EGF可促进I型胶原的合成，导致瘢痕疙瘩形成；而haFGF能通过对αI型前胶原基因表达的下行调节作用，抑制成纤维细胞的胶原合成，减少成纤维细胞的胶原蛋白的过量沉积，有助于防止瘢痕疙瘩的产生。因而应用haFGF治疗烧伤创面和慢性难愈性伤口(如：褥疮、慢性感染的伤口，糖尿病、营养缺乏症、类固醇化病人的伤口，以及放射性伤口等)，有着广阔的前景，可提高这类病人的伤口愈合速度和质量，进而提高患者的生活质量。

泊洛沙姆(poloxmer)为聚氧乙烯/聚氧丙烯的ABA嵌段共聚物，是药典收载的高分子辅料，具有良好的安全性和生物相容性，且无刺激过敏性。

目前有专利号02130957.4的发明专利公开了haFGF气雾剂，未见有haFGF凝胶剂的配方及制备工艺的报道。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种rh-aFGF温敏型凝胶剂，具有促进创面组织愈合，缩短愈合时间，且对皮肤无刺激性，无毒副作用，使用方便，易于清洗等特点。本发明的另一目的是提供rh-aFGF凝胶剂的制备方法。

本发明的温敏型凝胶剂在4℃时呈溶液状态，该凝胶剂由于在溶液状态下加入rh-aFGF溶液，使得制剂的均匀性更好，同时在4℃条件下操作能更好的保持rh-aFGF的稳定性。涂抹于皮肤上形成凝胶，凝胶基质使rh-aFGF缓慢释放，在一定程度上起到缓释的作用，其药物作用更加持久，促进创面组织愈合，加快愈合速度，使rh-aFGF的作用更加直接有效。同时具有对皮肤无刺激、无毒副作用，不沾染衣物，易于清洗等特点。

本发明提供了一种重组人酸性成纤维细胞生长因子的温敏型凝胶剂，包含作为活性成分的重组人酸性成纤维细胞生长因子和凝胶基质，其中所述凝胶基质包含基于凝胶基质重量10-50％重量的泊洛沙姆。