[发明专利]人类免疫缺陷病毒抗体化学发光免疫分析诊断试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，具体地，本发明提供了一种人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体化学发光免疫分析诊断试剂盒及其制备方法。

背景技术

获得性免疫缺陷综合征，又称艾滋病(AIDS)，是由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染所引起的一种免疫缺陷性疾病。由于该病目前尚无有效的治疗方法和预防疫苗，目前正以大约1.4万人受感染的速度扩大流行。据估计，我国HIV感染者已近100万，如不采取积极有效的控制措施，到2010年我国HIV感染者将达1000万，因此形式非常严峻。HIV感染诊断进而识别出早期感染的人群是AIDS预防控制工作的首要任务。因此，建立敏感实用的检测方法对于检测、诊断或血液筛查，控制艾滋病的流行就显得非常重要。

目前检测HIV的方法有100多种，其中HIV抗体检测的血清学诊断是发展最早、最便宜和最简单的HIV感染分析方法。最常用的检测HIV抗体的方法有酶联免疫试验(ELISA)、明胶颗粒凝集试验(PA)、免疫荧光分析(IFA)和斑点印迹等。其中ELISA由于具有操作简单、快速、适合大量样品的筛选和检测等优点，是目前临床上通用的初筛检测方法。但由于其灵敏度低从而受到了限制，后来又发展了灵敏度较高的化学发光免疫分析方法。这些方法在检测HIV抗体的原理上大多应用的是双抗原夹心法，这种方法具有很好的特异性，在方法学上也具有很大的优势。

但当前检测HIV抗体的方法均是将HIV重组抗原通过物理吸附的方法直接包被在固相载体，然后通过洗涤除去未结合上去的分析物或样品基质。这种直接包被方法会对分析参数有一些影响：(1)抗原通过物理吸附作用直接包被在固相上，会引起抗原在固相上结合的不均一性，因此，重现性差，温育时间长；(2)与在液相中抗原-抗体的结合反应不同，包被在固相上的蛋白(抗体或抗原)，其结合位点更不易被接近，因此会导致蛋白的免疫活性部分失活，有时活性甚至只达到包被蛋白量的10％左右；(3)结合到固相上抗原的量不仅与抗原自身的性质诸如疏水性、等电点等有关，还受抗原溶液的配制及保存等外在条件的影响。而本发明采用抗-FITC抗体与FITC标记的HIV抗原将HIV抗原结合到固相载体上，从而克服了物理吸附法直接包被HIV抗原的许多缺点。

近十年来标记免疫分析技术的研究和应用发展迅速，已广泛应用于生物医学基础理论研究及临床疾病诊断各领域。其中技术工艺成熟，具有先进性且实用性强，易于推广的主要有：放射免疫分析、酶免疫分析、时间分辨荧光免疫分析和化学发光免疫分析等四种。这些超微量检测技术的基本理论大体相同，它们的共同特点是灵敏度好、特异性强；不同之处是所用示踪剂及所发出的信号各异。根据大量的实验结果及临床应用资料，从实用性、稳定性、准确性及发展前景来看，依次为：化学发光免疫分析、时间分辨荧光免疫分析、放射免疫分析以及酶免疫分析。放射免疫分析法存在诸多缺点，如操作复杂、测定结果不稳定、试剂保存时间短、放射性污染、仪器昂贵等。

然而，现有技术中的化学发光免疫分析试剂盒均为封闭式全自动化学发光测量系统，需要昂贵的全自动化学发光测量仪，从而限制了推广使用，无法有效广泛地应用于临床诊断和科研工作。

发明内容

为了解决上述问题提出并完成了本发明。具体地，本发明解决了现有技术中的诊断试剂盒均一性、重现性差等问题。

本发明的目的是提供一种人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体化学发光免疫分析诊断试剂盒。

本发明的再一目的是提供一种制备上述试剂盒的方法。

根据本发明的HIV抗体诊断试剂盒包括以下组分：

1)抗-FITC抗体包被的固相载体；

2)FITC标记的HIV重组抗原；

3)酶标记的HIV抗原；

4)上述酶所作用的化学发光底物；以及

5)阴性对照液，所述阴性对照液为正常人血清。

6)阳性对照液，所述阳性对照液为新生牛血清稀释的阳性混合浆。

其中，所述固相载体为微孔板、塑料珠、塑料管或磁性颗粒。所述酶为碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶。上述酶所作用的化学发光底物为(金刚烷)-1，2-二氧乙烷、3-(2′-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3″-磷酰氧基)苯基-1，2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star、鲁米诺或异鲁米诺。此外，所述HIV重组抗原为gp41，gp120，gp36。

本发明还提供了一种制备上述试剂盒的方法，该方法包括以下步骤：

1)以抗-FITC抗体包被的固相载体；

2)用FITC标记HIV重组抗原，获得FITC标记的HIV重组抗原；