[发明专利]甘蓝杂交种“夏光”、“早夏16”指纹图谱的建立

说明书

技术领域

本发明涉及甘蓝种子鉴定技术，具体地说是甘蓝的DNA指纹图谱及建立方法和应用。

背景技术

目前，我国生产中推广应用的主栽甘蓝(Brassica oleracea var.capitata)品种基本上为杂种一代。杂种一代能综合亲本的许多优良性状，经济效益较好。

但是在制种过程中会由于管理措施不当和自交不亲和性本身的缺陷而常常产生自交种子，即假杂种，导致种子纯度下降。因此，提高杂交种纯度是杂种优势利用研究领域的重要课题。目前，品种鉴定和种子纯度分析方法大致有三种，即大田形态、生化标记和DNA指纹图谱鉴定法。传统的大田鉴定法以种子、幼苗、叶、花、果实、花粉等组织器官的颜色、形态等农艺性状作为鉴定的观测指标，在生产实践中虽然是一种较为可行的方法，但大田鉴定需要额外占用土地，周期长、花费大，不仅受季节限制，而且很多性状的表现受栽培措施及环境因子的影响，鉴定者的观察经验也制约着鉴定的准确性。大田鉴定最大的缺陷是不能及时提供种子纯度信息，不能在种子大量交易前提供有关种子的质量信息，对种子质量不能起到预先监督的作用。生化鉴定方法包括蛋白质电泳和同工酶电泳，已得到日益广泛的应用，但不能完全显示品种间的多态性，难以对亲缘关系较近的品种进行有效的区分。

发明内容

本发明的目的是提供一种甘蓝杂交种“夏光”、“早夏16”指纹图谱的建立方法和应用，以克服现有技术存在的不足。

本发明的技术构思是这样的：

DNA指纹图谱鉴定法是以DNA的多态性为基础的分子标记方法，可以弥补和克服在种子纯度的形态学鉴定及同工酶、种子蛋白电泳鉴定中的许多缺陷和难题。本发明利用SRAP、RAPD技术构建了长江中下游地区甘蓝主栽品种“夏光”、“早夏16”与其各自亲本的DNA指纹图谱，可以为这些品种的鉴定和纯度检测提供科学依据，进而保护生产者和使用者的合法权益。

本发明的甘蓝杂交种“夏光”、“早夏16”及其亲本的DNA指纹图谱，是由“1”和“0”组成的数据，“夏光”母本的数据为10111100110111；“夏光”的数据为11111111110111；“夏光”父本的数据为11111111011111；“早夏16”母本的数据为10111111111101111；“早夏16”的数据为11111011010010001；“早夏16”父本的数据为11110101111100000。其中所述数字“1”表示图谱中某个位置上有扩增带存在，数字“0”表示在某个位置上没有扩增条带存在。

所说的“夏光”、“早夏16”甘蓝杂交种和亲本可以采用上海市农业科学院园艺研究所公开销售的产品；

甘蓝DNA指纹图谱的建立方法，包括如下步骤：

1)提取及纯化甘蓝基因组的DNA；

2)用获得的甘蓝DNA为模板进行RAPD分析；

3)选择有代表性的多态性RAPD扩增条带，根据所选择条带的有、无构建供试材料DNA指纹图谱。

其中所述“夏光”、“早夏16”甘蓝杂交种及其各自亲本都有其特异的DNA指纹，可以相互区分开来。所述RAPD扩增中采用的引物为S42，是由上海生工生物工程有限公司合成的寡核苷酸随机引物，其碱基序列为GGACCCAACC。

本发明的DNA指纹图谱可以应用于“夏光”和“早夏16”甘蓝杂交种种子纯度的鉴定。

本发明具有如下优点：

1.本发明创建了“夏光”、“早夏16”甘蓝杂交种及其亲本的DNA指纹图谱，公开了用DNA指纹分析技术对甘蓝种子鉴定的研究结果，其建立方法能从遗传本质上对甘蓝种子进行鉴定，因此准确、可靠，具有法律效应。

2.采用本发明，在对“夏光”和“早夏16”甘蓝种子样品进行真实检测时，用目前广泛应用的快速、微量DNA提取法提取待测样品的DNA，用提取的DNA作为模板，进行RAPD分析，在几个小时内就可以知道该DNA指纹，因此，就能迅速判断出它的真实性。

3.由于本发明DNA指纹图谱是用图的形式表式，看起来比较直观、易懂；并由于转换成了数码形式，便于计算机识读和分析。

附图说明：

图1为本发明建立的引物S42的RAPD指纹图谱，其中：M为DGL 2000DNA标识；1为“夏光”母本；2为“夏光”；3：为“夏光”父本；4为“早夏16”母本；5为“早夏16”；6为“早夏16”父本；箭头标出的为互补型特征片段。

图2RAPD指纹图谱线段示意，其中：1为“夏光”母本；2为“夏光”；3：为“夏光”父本；4为“早夏16”母本；5为“早夏16”；6为“早夏16”父本。

具体实施方式：

实施例1