[发明专利]一种农杆菌介导的番茄外植体高效转化系统

权利要求书

1.一种番茄外植体转化系统，包括以下部分：

用于制备外植体的沪番1479号番茄品种的种子；

带有目的基因的根癌农杆菌；

培养基；

所说的农杆菌为包含双元载体系统的根癌农杆菌；

所说的培养基包括：作为基础培养基的MS培养基，在MS培养基中加入ZT2.0mg/L、IAA0.2mg/L的预培养培养基，在MS培养基中加入ZT2.0mg/L、IAA0.2mg/L、选择性抗生素的愈伤诱导选择培养基，在MS培养基中加入IAA0.1mg/L、选择性抗生素的生根培养基；选择性抗生素的种类、浓度根据质粒中抗性基因种类确定。

2.如权利要求1所述的番茄外植体转化系统，其特征在于，其中所说的外植体是沪番1479号番茄种子长成的无菌苗的子叶。

3.如权利要求2所述的番茄外植体转化系统，其特征在于，其中所说的外植体是沪番1479号番茄种子长成的无菌苗的下胚轴。

4.如权利要求1所述的番茄外植体转化系统，其特征在于，其中所说的目的基因是黄瓜花叶病毒运动蛋白缺陷基因(CMV-dMP)k130。

5.如权利要求1所述的番茄外植体转化系统，其特征在于，其中所说的双元载体系统包含带有卡那霉素抗性基因的微型Ti质粒。

6.如权利要求5所述的番茄外植体转化系统，其特征在于，其中所说的选择性抗生素包括50-100mg/L的卡那霉素。

7.一种农杆菌介导的番茄外植体转化方法，包括如下步骤：

番茄品种沪番1479的外植体，经带有包含目的基因的质粒的农杆菌接种后，在MS培养基中加入ZT2.0mg/L、IAA0.2mg/L的预培养培养基培养1天；在MS培养基中加入ZT2.0mg/L、IAA0.2mg/L、选择性抗生素的愈伤诱导选择培养基上培养，每隔2-3周继代一次，直至长出再生芽；再生芽在MS培养基中加入IAA0.1mg/L、选择性抗生素的生根培养基培养直至生根，得到再生苗；再生苗移栽得到转基因的再生植株。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，其中所说的外植体按如下方法制备：沪番1479号番茄种子经75％的酒精、含有TWEEN的10％的次氯酸钠水溶液消毒，在MS培养基，25℃，3500lx光强下，16小时光照然后8小时黑暗条件下培养萌发，12天左右获得无菌苗；取无菌苗的子叶、下胚轴，即为外植体。