[发明专利]人乳头瘤病毒16型外壳蛋白病毒样颗粒及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种病毒样颗粒，其特征在于该病毒样颗粒由选自序列为SEQ ID N0.1的HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或核苷酸序列为SEQ ID NO.2的HPV16L1N/L2-LTK63嵌合基因所编码，该病毒样颗粒由下列步骤获得：

1)使用pFastBacDual-HPV16L1N、pFastBacDual-HPV16L1N/L2或pFastBacDual-HPV16L1N/L2-LTK63linkB重组质粒分别转化感受态大肠杆菌DH10Bac；

2)筛选鉴定获得分别重组有HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63linkB基因的重组Bacmid；

3)将所述重组Bacmid转染对数生长期的昆虫细胞，转染后收集上清，获得含有HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63linkB基因的重组杆状病毒；

4)用所述含有HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63linkB基因的重组杆状病毒感染对数生长期的Sf9昆虫细胞，使重组杆状病毒在感染细胞内分别表达导入的HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63基因；

5)裂解感染有含HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63linkB基因的重组杆状病毒的细胞，纯化获得HPV16L1NVLPs、HPV16L1N/L2VLPs或HPV16L1N/L2-LTK63嵌合病毒样颗粒。

2.根据权利要求1所述的病毒样颗粒，其中所述的pFastBacDual-HPV16L1N/L2重组质粒于2006年9月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为CGMCC ID NO.1802。

3.根据权利要求1所述的病毒样颗粒，其中所述的pFastBacDual-HPV16L1N/L2-LTK631inkB重组质粒于2006年9月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为CGMCC ID NO.1803。

4.一种序列号为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的HPV16L1N基因。

5.一种序列号为SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的融合基因L2-LTK63。

6.根据权利要求5所述的融合基因L2-LTK63，其编码的蛋白质具有SEQID NO.3所示的氨基酸序列。

7.一种含有HPV16L1N基因的pFastBacDual-HPV16L1N重组质粒，其特征在于HPV16L1N基因位于PH启动子的下游。

8.一种保藏号为CGMCC NO.1802的pFastBacDual-HPV16L1N/L2重组质粒，其特征在于含有位于P10启动子下游的HPV16L2基因。

9.一种保藏号为CGMCC NO.1803的pFastBacDual-HPV16L1N/L2-LTK631inkerB重组质粒，其特征在于含有位于P10启动子下游的L2-LTK63基因。

10.含有如权利要求1所述HPV16L1N基因、HPV16L1N/L2基因或HPV16L1N/L2-LTK63嵌合基因的重组Bacmid。

11.含有如权利要求10所述的重组bacmid的大肠杆菌DH 10Bac菌株。

12.含有如权利要求10所述的重组Bacmid的昆虫Sf9细胞。

13.如权利要求12所述的昆虫Sf9细胞表达的重组杆状病毒。

14.如权利要求1所述的病毒样颗粒在制备用于预防HPV16病毒的感染以及感染诱发的宫颈或外阴部位的癌前病变及恶性肿瘤的疫苗中的应用。

15.根据权利要求14所述的应用，其中所述的恶性肿瘤是与HPV16感染相关的宫颈癌、阴茎癌、口腔鳞状细胞癌、食道癌或前列腺癌。