[发明专利]人乳头瘤病毒16型外壳蛋白病毒样颗粒及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是采用基因分子生物学技术及基因工程蛋白技术，获得一种修饰后的，具有高度组装成病毒样颗粒(VLPs)能力的，病毒衣壳蛋白基因；及其表达出来的重组蛋白，即病毒样颗粒。本发明还涉及该病毒样颗粒的疫苗及其用途。

发明背景

人乳头瘤病毒是一类无胞膜的小DNA病毒，现已发现100多型，主要感染人的粘膜上皮，引起上皮组织的良恶性增生。研究发现有十五种HPV亚型的感染可引起宫颈癌前病变及宫颈癌，这些亚型被定义为高危型如HPV16，18，31，33，45，等。大量的研究结果表明慢性持续性高危型人乳头瘤病毒感染是妇女宫颈癌的明确诱因，其中由HPV16感染诱发的宫颈癌占宫颈癌发病总数的50％以上。研究发现我国宫颈癌患者HPV16的阳性率高达79.6％(Wu Y，et.al.Association ofhigh-risk HPV types and viral load with cervical cancer in China.J Clin.Virol.2006；35(3)：264-269)。动物实验及临床试验结果表明，利用基因工程重组技术表达的病毒外壳蛋白L1或L1及L2，体外可自组装成空的病毒颗粒(Virus-likeparticles，VLPs)，VLPs除了不含病毒核酸，不具致病性之外，但可经病毒的感染相关受体高效率的进入宿主细胞，包括抗原递呈细胞，其它特性如外形、空间构象以及免疫原性几乎与天然病毒颗粒完全一样，VLPs免疫后可诱发机体产生高滴度的中和抗体，保护机体免受同一型别病毒的攻击或自然感染。目前国际上VLPs疫苗的表达体系主要有两种：杆状病毒-昆虫细胞表达体系及啤酒酵母表达体系，两种表达体系生产的VLPs均在欧美等地区进行了临床试验，结果表明VLPs疫苗安全性好，在性活跃期及性活跃期前妇女接种HPV16及HPV18VLPs疫苗三次后，通过迄今5-6年随访观察发现，接种疫苗可以明确高效的预防宫颈HPV感染、宫颈管内上皮不典型增生及早期宫颈癌的发病率。现有技术中，人们研制的利用酵母表达体系获得的HPV16、HPV18、HPV6、HPV11L1VLPs宫颈癌预防疫苗“Gardasil”已经上市。还有人利用杆状病毒-昆虫细胞表达体系获得的HPV16L1VLPs、HPV18L1VLPs疫苗也在世界许多国家及地区进行临床试验，结果表明疫苗接种3次后对宫颈HPV16、18病毒感染、宫颈癌前病变及宫颈癌的预防保护效果在5年期以上(Harper DM，et.al.Efficacy of a bivalent L1 virus-likeparticle vaccine in prevention of infection with human papillomavirus types 16 and 18in young women：a randomised controlled trial.Lancet.2004；364：1757-1765；Harper DMet.al.Sustained efficacy up to 4.5 years of a bivalent L1 virus-like particle vaccineagainst human papillomavirus 16 and 18：follow-up from a randomised control trial.Thelancet.2006；Internet：1-9.)。因此病毒样颗粒疫苗市场开发前景广阔。特别是广大的贫困落后地区是宫颈癌的高发区，急需研发具有使用价值的VLPs疫苗，降低疫苗的成本，提高人群的免疫保护效率。