[发明专利]葡萄酒中DNA的简单快速提取方法

权利要求书

1.葡萄酒中DNA的简单快速提取方法，包括以下步骤：

A用纯水将5g的Silica清洗干净，加入5ml水悬浮Silica沉淀，混匀，置4℃备用；

B建立最佳吸附条件的葡萄酒

在磁力搅拌器上缓慢加入下列制剂调节葡萄酒：

1)加入10N的NaOH溶液调节葡萄酒的pH为8.0左右；

2)加入CTAB至1％(w/v)；

3)加入NaCl至1.0M；

4)加入巯基乙醇至0.2％(v/v)；

C葡萄酒DNA的吸附及回收

(1)向上述葡萄酒混合液中加入Silica悬浮液；

(2)4℃下保育1-2小时，不断摇晃、振荡；

(3)离心，5000g，5min，4℃；

(4)弃上清液，用含0.1M Tris-HCl，pH 8.0，1％CTAB，1M NaCl的冲洗液短暂冲洗Silica沉淀1-2次；

(5)离心，5000g，5min，收集Silica沉淀；

(6)向上述Silica沉淀加入等量的纯水，摇匀，于65℃保温5-10min热洗脱DNA；

(7)离心(10000g，5min)收集含有DNA的上清液；

(8)等体积氯仿抽提步骤(7)的上清液，离心10000g，3min，收集含有DNA上相；

(9)用异丙醇沉淀法回收、浓缩上清液中DNA；

(10)回收的葡萄酒DNA溶于50μl TE(10mM Tris-HCl，pH 8.0)缓冲液。

2.如权利要求1所述的葡萄酒中DNA的简单快速提取方法，其特征在于：所述用纯水将5g的Silica清洗干净，是指5g干燥的Silica与5ml纯水充分混合，室温沉降5-10小时，吸去上清液，再加入5ml纯水充分混合，室温沉降5-10小时，吸去上清液。

3.如权利要求1所述的葡萄酒中DNA的简单快速提取方法，其特征在于：所述向上述葡萄酒混合液中加入Silica悬浮液；是指按5ml Silica/1000ml的量加入Silica悬浮液。

4.如权利要求1所述的葡萄酒中DNA的简单快速提取方法，其特征在于：所述等体积氯仿抽提步骤(7)的上清液，是指重复氯仿抽提步骤。

5.如权利要求1所述的葡萄酒中DNA的简单快速提取方法，其特征在于：所述氯仿抽提步骤(7)的上清液，是指增加苯酚抽提。

6.如权利要求1所述的葡萄酒中DNA的简单快速提取方法，其特征在于：本发明可以将以下方法同时使用：

a所述用纯水将5g的Silica清洗干净，是指5g干燥的Silica与5ml纯水充分混合，室温沉降5-10小时，吸去上清液，再加入5ml纯水充分混合，室温沉降5-10小时，吸去上清液；

b所述所述向上述葡萄酒混合液中加入Silica悬浮液；是指按5mlSilica/1000ml的量加入Silica悬浮液；

c所述等体积氯仿抽提步骤(7)的上清液，是指重复氯仿抽提步骤；

d所述氯仿抽提步骤(7)的上清液，是指增加苯酚抽提。