[发明专利]葡萄酒中DNA的简单快速提取方法

说明书

技术领域

本发明属于提取葡萄酒中DNA的技术，具体就是提取葡萄酒DNA以用于鉴别葡萄酒真假的DNA分析技术。

背景技术

众所周知，葡萄酒是一种世界通畅性的酒种，具有很高的营养价值和保健作用。葡萄酒发酵理论的奠基人，法国大科学家路易.巴斯德(L. Pasteur)曾说：“葡萄酒是最健康的饮料”。医学研究表明，葡萄酒中含有大约600种对人体有益的成份，其中的白藜芦醇(resveratrol)具有预防癌症、降低胆固醇的效果(Jang et al.1997)。目前，饮用葡萄酒的人越来越多，名优红(白)葡萄酒尤其为世人所青睐。在许多发达国家，喝葡萄酒已经成为一种生活时尚。

长期以来，市场上各种葡萄酒的质量参次不齐，价格从2美元到200美元不等，并且还存在用酒精、糖精、葡萄香精、色素等按一定比例勾兑而成的假葡萄酒。葡萄酒的品质主要由经验丰富的品酒师的感官辨别，而普通的经销商和消费者很难辨别名优葡萄酒与假冒伪劣产品的区别。近年来，国际上一些著名的葡萄酒公司及有关研究机构试图通过DNA分析技术鉴定葡萄酒的品种，以保护其名贵葡萄酒品种，赢得消费者的信赖。例如，澳大利亚Handry公司将DNA防伪标签标用于他们的陈年葡萄酒上。然而，通过DNA分析鉴定葡萄酒品种的技术，在很大程度上取决于从葡萄酒中提取的DNA的质和量。

由下列文献可知，(Jang M，Cai L，Udeani GO et al.(1997)Cancerchemopreventive activity of resveratrol，a natural product from grapes.Science 275：218-220)、(Rogstad SH.(2003)Plant DNA extraction usingSi lica.Plan tMol.Biol.Rep.21：463a-463g)、(Siret R，Gigaud O et al.(2002)Analys i s of grape Vitis vinifera L. DNA in must mixtures andexperimental mixed wines using microsatellite markers.J.Agric.FoodChem.50(13)，3822-3827)、(García-Beneytez E，Moreno-Arribas MV et al.(2002)Application of a DNA analysis method for the cultivaridentification of grape musts and experimental and commercial wines ofVitisvinifera L.using microsatellite markers.J.Agric.Food Chem.50(21)，6090-6096)和(SiretR，BoursiquotJM et al.(2000)Toward theauthentication of varietal wines by the analysis of grape(Vitis viniferaL.)residual DNA in must and wine using microsatellite markers.J.Agric.Food Chem.48(10)，5035-5040)，目前从红(白)葡萄酒中提取DNA的方法，均是通过异丙醇沉淀(Siret R et al.2000，2002；García-Beneytez et al.2002)。从新葡萄酒(must)或未经过澄清处理的葡萄酒中提取DNA相对容易，因为其中可能包含破碎的葡萄组织，从离心收集的沉淀中可以提取相当量的DNA。对于商业零售的瓶装葡萄酒，由于经过发酵、澄清等多种工序，来源于葡萄组织的DNA被破坏殆尽，瓶装葡萄酒中残留的痕量DNA片段必然很小。因此，从零售的瓶装葡萄酒中提取DNA需要大体积(500-1000ml)的葡萄酒，常规的异丙醇沉淀法不仅操作不便，且DNA产率低，重复性差。因此，建立一种简便快速的从葡萄酒中提取DNA的技术势在必行，以满足日益增长的利用DNA分析技术鉴定葡萄酒品质的需要。