[发明专利]一种用于检测apoA I、apoB的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗体的制备方法以及测定血清成分的试剂盒，特别是抗APOA I、APOB抗体的制备方法及测定血清中的apoA I、apoB的试剂盒，可广泛应用在医学及生物化学技术领域。

背景技术

载脂蛋白A I(apo A I)是apoA族最多的一种组份，apoA I为单一多肽链，由243个氨基酸残基组成，分子量为28300D，是高密度脂蛋白(HDL)的主要载脂蛋白。HDL具有防止动脉粥样硬化的作用，因此，测定血清(浆)中apoA I的含量已成为防止心脑血管疾病的常规检测项目。载脂蛋白B(apoB)是低密度脂蛋白(LDL)的主要蛋白质，而LDL增高是公认的致动脉粥样硬化的危险因子，因此，血清apoB的测定在临床上有着非常重要的作用，联合检测apoA I、apoB对早诊断、早预防、早治疗心脑血管疾病提供了可靠的依据。

已知测定apoA I、apoB的方法有层析法、电泳法、免疫分析法、其中层析法和电泳法操作繁琐，不能进行批量样本分析和直接上全自动生化分析仪等缺点，而免疫分析法中的免疫扩散法、放射免疫分析法、荧光标记免疫分析法、酶标记免疫分析法、化学发光免疫分析法也存在诸多不足之处，如需要特殊的设备，样品需要预处理，不能上全自动生化分析仪进行批量检测分析等。临床上常用的免疫透射比浊法因其样本用量少，可直接在全自动生化分析仪上进行批量样本分析、操作简单受其欢迎，但目前建立的方法及试剂都存在一些缺点和/或不足，主要表现在：一是抗体效价不高，都在1∶16以下，特异性、亲合力、亲和力不好，二是校准血清是以人血清为基质，虽然乙肝表面抗原阴性、HIV检测阴性、丙氨酸氨基转移酶正常的人血清，但这也很难排除没有其他传染病的可能，给操作者带来很大的危险性，而且为冻干品，每批的定值不一，使用前需用水复溶，操作极其不便，而且不同的复溶者复溶后瓶间差异大，复溶后必须冰冻保存，特别是不能反复解冻使用，不但造成试剂浪费，而且质量也得不到保证，测定结果差异大，其稳定性也不好；三是对高脂、黄疸、溶血样本抗干扰能力差。四是采用单点校准液定标，不符合曲线回归方程计算，导致出现高值偏低，低值偏高的现象，所测结果不准确。五是抗血清在短时间内出现沉淀，使上机操作困难，影响检测效果。

另外，检测apoA I、apoB所需的抗apoA I、apoB抗体的制备过程中，抗原的提取方式直接关系到抗体(抗血清)质量的好坏。已知的方法是采用倍比稀释的密度梯度超离心技术收集到apoA I、apoB量极高的HDL和LDL，然后再采用双脱脂法去除脂肪和剩余的杂蛋白，即可得到电泳纯的apoA I和apoB抗原，然后进行免疫。上述方法的缺点是超离心所用的时间较长，而且其脱脂和超离的过程中往往使蛋白发生了变性和改变了蛋白的空间结构，改变了蛋白的免疫原性，从而免疫所得抗血清效价不高。采用双扩散免疫电泳，apoA I效价大于1∶32，apoB效价大于1∶256的机率非常的小。

发明内容

本发明的一个目的是克服上述背景技术的不足，提供一种抗apoA I、apoB抗体制备方法的改进，所述的抗体制备方法在制备过程中应具有无须超速离心处理、制备时间短、抗体的效价高的特点；

本发明的另一个目的是克服上述背景技术的不足，提供一种用于检测apoA I、apoB的试剂盒的改进，所述的检测试剂盒应具有样本无需稀释、操作简单、准确度高、重复性好、抗干扰能力强，基质稳定的特点。

为了达到上述目的，本发明人进行了广泛深入的研究，结果通过用特殊的方法提起的apoA

I、apoB抗原经免疫动物后，制得一种与人血清中的apoA I、apoB抗原有高度特异反应性的抗体；并利用该抗体配置成检测试剂，并配以相应的校准液，从而完成了本发明。

本发明提供的技术方案是：

一种制备抗apoA I、apoB抗体的方法，该方法包括apoA I、apoB抗原的提取，动物免疫和抗体纯化，所述的apoA I、apoB抗原的提取步骤是：用脂蛋白沉淀剂与表面活性剂-血清复合物或表面活性剂-血浆复合物混合，使脂蛋白沉淀，沉淀剂、表面活性剂、血清或血浆三者体积配比为1∶2∶1至1∶4∶3；然后弃去上清液，收集沉淀物后洗涤，将洗涤后所得到的沉淀物用脱脂剂脱脂，除去脱脂剂，加入apoA I溶解剂，得apoB，或加入apoB溶解剂，得apoAI，最后将所得apoA I、apoB采用SDS-PAGE电泳凝胶切割，收集含AapoA I、apoB凝胶研碎，提取apoA I、apoB抗原。