[发明专利]一种土壤羟胺还原酶活性检测时的显色方法

权利要求书

1.一种土壤羟胺还原酶活性检测时的显色方法，其特征在于：

1)取0.5-1.0g风干土壤置于100ml带磨口塞得瓶中，加入10-20mg碳酸钙，仔细混合均匀；然后加入1-2ml 0.5-1％的盐酸羟胺溶液和1-2ml 1％的葡萄糖溶液；在10-12mm水银柱的压力下抽出瓶中空气；将瓶仔细摇匀，并在30±1℃恒温箱中放置5±0.2h；用灭菌土壤加试剂作为对照；在培养结束后，向瓶中加入50ml蒸馏水和2-3ml铝钾矾饱和溶液，摇均后用致密滤纸过滤得提取液；

2)取土壤培养后的提取溶液1ml于50ml容量瓶中，加入含Fe³⁺0.002-0.01mol·L^-1的三价铁盐溶液1-5ml、0.8-2.0g·L^-1α-α’联吡啶溶液1-5ml，然后用蒸馏水定容至刻度，显色反应在常温下进行，所得溶液显橙色，显色达到稳定，在520nm下用分光光度计比色测定其吸光值为A；

3)在520nm下比色测定一系列两组或两组以上已知浓度的羟胺溶液0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00gNH₂OH 1·L^-1的吸光值A’，以羟胺溶液的浓度和测定的吸光值A’制作标准曲线，得到斜率b；

4)根据吸光值A和斜率b，计算提取液中的羟胺浓度S：S＝A*b，其中，A为提取液的吸光值，b为标准曲线的斜率；

5)计算样品中的羟胺浓度；

计算羟胺还原酶活性，计算公式为：[(S₁-S)V₁V₂/1000V₃]/W，单位mgNH₂OH·g^-1soil·5h^-1；式中，S₁为对照中的NH₂OH含量(mg·L^-1)；S为样品中的NH₂OH含量(mg·L^-1)；V₁为提取液总体积(ml)；V₂为显色时定容后的溶液体积(ml)；1000为单位转换系数；V₃为测定时所取滤液体积，W为称土样重(g)。

2.根据权利要求1所述的显色方法，其特征在于：如果在40min内不能完成吸光值测定，应加入1-5ml 0.01-0.1mol·L^-1的KF或NaF溶液作为掩蔽剂以阻止副反应发生。

3.根据权利要求1所述的显色方法，其特征在于：三价铁盐溶液为氯化铁溶液、溴化铁溶液、硫酸铁溶液或硫酸铁铵溶液，溶液中Fe³⁺浓度为0.002-0.01mol·L^-1，显色时加入量为1-5ml。

4.根据权利要求1所述的显色方法，其特征在于：α-α’联吡啶溶液为α-α’联吡啶的乙醇溶液或α-α’联吡啶的9 5％乙醇(5％水)溶液，其浓度为0.8-2.0g·L^-1，显色时加入量为1-5ml。