[发明专利]一种新颖酶联－环介导等温基因扩增技术(E－LAMP)的建立与应用

权利要求书

1.一种用于RNA病毒检测的酶联-环介导等温扩增技术(E-LAMP)，其特征是将普通的酶联免疫技术与RT-LAMP有机结合，通过标记引物、包被微孔板和RT-LAMP中产物三者之间的特异性结合而最终呈现颜色反应。

2.权利要求1所述的RNA病毒检测的酶联-环介导等温扩增技术(E-LAMP)的标记引物包括：对其中一条内引物(FIP)进行生物素标记，对另一条内引物进(BIP)行地高辛标记。

3.权利要求1所述的RNA病毒检测的酶联-环介导等温扩增技术(E-LAMP)，其包被微孔板是指以5μg/ml的包被浓度在酶标板或微孔反应板上包被链酶亲和素。

4.权利要求1所述的RNA病毒检测的酶联-环介导等温扩增技术(E-LAMP)的最终颜色反应是：通过预包被于固相载体上的链霉亲和素与生物素之间的连接将反应产物固化到载体上，再使用辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗地高辛抗体使固相载体中的扩增结果呈现出颜色反应。

5.权力要求1所述的RNA病毒检测的酶联-环介导等温扩增技术(E-LAMP)的引物包括表2所列的基因序列及其每种序列的互补序列或变体。

6.权力要求1所述的RNA病毒检测的酶联-环介导等温扩增技术(E-LAMP)的检测程序，包括：合成引物探针、提取样本的RNA、包被酶标板、酶联-环介导等温扩增(E-LAMP)反应、显色、酶标仪读值。

7.权力要求1所述的RNA病毒检测的酶联-环介导等温扩增技术(E-LAMP)的反应体系如下：F3与B3，5pmol；BIP与FIP，40pmol；Loop-1与Loop-2，20pmol；其它反应组分终浓度为1.0mM dNTP，1mM betaine，6mM MgSO4，2.5μl 10×Bst-DNA Polymerase Buffer，8UBst-DNA polymerase，1U AMV反转录酶，5μl HCV RNA样品，补水至25μl。

8.权利要求1所述的RNA病毒检测的酶联-环介导等温扩增技术(E-LAMP)的反应温度为63℃。

9.权利要求1所述的RNA病毒检测的酶联-环介导等温扩增技术(E-LAMP)的反应时间为1.5h。

10.权力要求1所述的RNA病毒检测的酶联-环介导等温扩增技术(E-LAMP)包括如下病毒及其变异株：丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)。

11.权力要求1所述的RNA病毒检测的酶联-环介导等温扩增技术(E-LAMP)应用范围包括：HCV和其它RNA病毒。

12.权力要求11所述的本发明的应用范围包括人用，兽用及其它生物防御用。