[发明专利]兔胚胎干细胞系及其建系方法

权利要求书

1.一种利用无血清培养体系建立未分化的多能兔胚胎干细胞系的方法，包括下列步骤：

(a)收集囊胚期的兔胚胎；

(b)在无血清培养基中培养从囊胚中分离出来的内细胞团；

(c)从内细胞团的生长物中挑选出未分化的兔胚胎干细胞，传至新的培养基中；

(d)在体外长期传代兔胚胎干细胞，并使之保持未分化状态。

2.根据权利要求1的方法，其中用于培养兔胚胎干细胞系的培养基中含有商购或自制的血清替代物。

3.根据权利要求1的方法，其中用于培养兔胚胎干细胞系的培养基中添加了生长因子。

4.根据权利要求3的方法，其中添加的生长因子为bFGF。

5.根据权利要求1的方法，其中兔胚胎通过自然交配或体外受精获得。

6.根据权利要求1的方法，其中兔胚胎通过孤雌生殖产生。

7.根据权利要求1的方法，其中兔胚胎通过体细胞核移植(SCNT)产生。

8.根据权利要求1的方法，其中通过机械剥离法或免疫外科手术法从兔胚胎的囊胚中分离内细胞团。

9.根据权利要求1的方法，其中饲养细胞为：

1)任何类型的来自小鼠、兔或其他哺乳动物的体细胞；

2)任何类型的由小鼠、兔或其他哺乳动物胚胎干细胞分化而来的细胞；或者

3)任何永生化的哺乳动物细胞系。

10.根据权利要求9的方法，其中饲养细胞来自受孕12-15天的小鼠胚胎。

11.根据权利要求1的方法，其中通过形态观察来选择未分化的兔胚胎干细胞。

12.一种核移植的方法，其中利用如权利要求1-11中任一项的方法中所获得的兔胚胎干细胞系作为核供体，通过核移植技术获得兔胚胎、兔胎儿、新生兔或成体兔。

13.根据权利要求12的方法，包括如下步骤：

(a)将rbES细胞与去核的兔卵母细胞融合；

(b)使用电脉冲和/或化学物质激活核移植单元；

(c)将处于着床前任何阶段的核移植单元移植入代孕母兔或其他代孕哺乳动物母体的生殖系统中；

(d)使植入的胚胎在体内发育。

14.根据权利要求13的方法，其中“着床前阶段”包括1-细胞、2-细胞、4-细胞、8-细胞桑椹和囊胚阶段。

15.根据权利要求13的方法，其中植入的胚胎在体内进一步发育成兔胎儿、新生兔或成体兔。

16.根据权利要求12-15中任一项的方法，用于产生兔子。

17.根据权利要求16的方法，其中所述兔子生产重组蛋白。

18.根据权利要求17的方法，其中在克隆动物的乳汁中生产所述重组蛋白。

19.根据权利要求17的方法，其中在克隆动物的血液中生产所述重组蛋白。

20.根据权利要求12的方法，用于产生具有特定基因突变的兔子，其中所述突变可以通过导致DNA序列变化的一个或几个碱基的插入、缺失或自然突变产生。

21.根据权利要求12-20中任一项的方法所获得的具有商业价值的生物学产品。

22.根据权利要求12-20中任一项的方法所获得的兔子的在生产重组蛋白、药物筛选、研发和毒理测试以及组织工程中的用途。