[发明专利]土鳖干粉水提物和酶解物的制备及在医学中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及中药材有效部位的制备工艺，尤其涉及土鳖干粉的有效部位制备工艺，本发明还涉及从有效部位中分离得到的相关多肽、其氨基酸序列、其指纹图谱以及它们在治疗带状疱疹中的应用，属于生物医药领域。

背景技术

带状疱疹是常见的皮肤疾患，不仅波及大量人群，而且有些严重病例可致死亡。1980年代初，江西省皮肤病专科医院在皮肤病调研中，偶然发现单味土鳖虫(Eupolyphaga Seu Steleophaga；别名：地鳖、土鳖、过街、地乌龟、节节虫、臭虫母；产地：湖南、湖北、江苏)对带状疱疹有明确疗效。此后，土鳖虫干粉便作为医院制剂在江西省皮肤病专科医院用于治疗带状疱疹、水痘、单纯疱疹和生殖器疱疹等病毒感染性皮肤病。在接受治疗的三万多人次中，几乎全部获得了满意的疗效。土鳖虫干粉治疗带状疱疹、水痘、单纯疱疹和生殖器疱疹等病毒感染性皮肤病的优点是疗效好、见效快、治疗时间短、副作用小；缺点是用量大，每日需服2次，每次多达10克。这种大剂量的治疗给病人带来了明显的不便。

发明内容

本发明依据江西省皮肤病专科医院的院内制剂土鳖虫干粉在治疗带状疱疹、水痘、单纯疱疹和生殖器疱疹等病毒感染性皮肤病中显示的疗效好、见效快、治疗时间短和副作用小等优点，针对用量大给病人带来不便的缺点，发明人依据土鳖及土鳖干粉的蛋白质性质、蛋白质经口服进入胃可被胃蛋白酶降解为多肽的性质，以及多肽的良好水溶性，推测土鳖及土鳖干粉的直接水提物和酶解物有可能在不减弱治疗效果的前提下减少服药量。

本发明首先所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种从土鳖虫干粉中提取治疗带状疱疹有效部位的工艺以及由该工艺所得到的一系列多肽组分，包括以下几个方面：

土鳖虫水提多肽粗粉的制备工艺以及所得到的水提多肽粗粉(W₀)；土鳖虫水提多肽粗粉的分离与纯化工艺以及所得到的多肽组分(W_I、W_II、W_III和W_IV)；土鳖虫酶解多肽粗粉的制备工艺以及所得到的多肽组分(E₀)；土鳖虫酶解多肽粗粉的分离与纯化工艺以及所得到的多肽组分(E_I、E_II和E_III)。

本发明首先所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

1.土鳖水提多肽粗粉的制备工艺，包括：将土鳖干粉与蒸馏水按3∶100的比例悬浮、37℃±3℃恒温搅拌40分钟、过滤、滤液冷冻干燥、得到的水提多肽粗粉(W₀)4℃保存。

2.土鳖水提多肽粗粉的分离与纯化工艺，包括：将水提多肽粗粉W₀与蒸馏水按10∶1的比例溶解、10000转离心10分钟、上清液加载到Sephadex G25层析柱上、以0.005mol/L乙酸胺缓冲液洗脱(流速0.5mL/min，紫外检测波长280nm)、收集的馏份按峰合并、冷冻干燥、得到W_I、W_II、W_III和W_IV四种水提多肽组分。

3.土鳖酶解多肽粗粉的制备工艺，包括：将土鳖干粉与蒸馏水按1∶20的比例悬浮、得到的悬浮液与模拟胃液(2.0gNaCl，3.2g胃蛋白酶，7ml浓HCl，双蒸水定容于1000ml，pH值为1.2)按1∶1的比例混合、37℃±3℃恒温振荡4小时、减压过滤、滤液用固体NaHCO₃调pH 7.0、3000转离心5分钟、收集上清液、冷冻干燥，得到的酶解多肽粗品(E₀)4℃保存。

4.土鳖酶解多肽粗粉的分离与纯化工艺，该工艺包括将权利要求6的酶解多肽粗粉与蒸馏水按10∶1的比例溶解、10000转离心10分钟、上清液加载到Sephadex G25层析柱上、以0.005mol/L乙酸胺缓冲液洗脱(流速0.5mL/min，紫外检测波长280nm)、收集的馏份按峰合并、冷冻干燥、得到E_I、E_II和E_III三种多肽组分。

本发明还涉及上述分离得到的水解多肽组分W_IV的HPLC指纹图谱和HPLC-ESI-MS指纹图谱，以及E₀、E_I、E_II和E_III四种酶解多肽组分的HPLC指纹图谱和HPLC-ESI-MS指纹图谱。