[发明专利]一种新型烟叶发酵酶制剂生产方法无效
| 申请号： | 200610153982.3 | 申请日： | 2006-09-15 |
| 公开（公告）号： | CN101144074A | 公开（公告）日： | 2008-03-19 |
| 发明（设计）人： | 谢勇;韩伟;陈应昆;何宝玉 | 申请（专利权）人： | 云南万芳生物技术有限公司;韩伟;陈应昆 |
| 主分类号： | C12N9/98 | 分类号： | C12N9/98;A24B15/20;A24B15/28 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 650118云南省昆明市高新开发区北区9号*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 新型 烟叶 发酵 酶制剂 生产 方法 | ||
1.一种用于烟叶发酵的专用复合酶制剂，该酶制剂由葡萄糖氧化酶、叶绿素氧化酶、类胡萝卜素氧化酶、蛋白酶及烟碱降解酶五类酶组成，其各组分的酶活比为：葡萄糖氧化酶12354，叶绿素氧化酶368，类胡萝卜素氧化酶231，蛋白酶36310，烟碱降解酶186；其制备方法如下：选取新鲜烟叶，组织匀浆，酶群经两次(NH4)2SO4分级沉淀纯化后得到粗酶液；该粗酶液用含0.1％EDTA的缓冲液进行酶金属离子螯合，螯合条件pH8.0，1-5℃，螯合时间10-20min；然后用0.3％Ca(NO3)2·4H2O和MgSO4进行离子置换，置换条件按粗酶液∶置换溶液1∶0.001体积比反应，1-5℃，置换时间8-12hr或过夜，完成酶分子修饰；经修饰的酶分子，于1-5℃条件下用0.01％蔗糖低聚物进行二次修饰保护，反应时间至少10hr以上；经过这样处理，即可获得所述的用于烟叶发酵的耐高温专用复合酶制剂。
2.权利要求1所述的复合酶制剂的生产方法，其特征在于：该酶制剂由葡萄糖氧化酶、叶绿素氧化酶、类胡萝卜素氧化酶、蛋白酶及烟碱降解酶五类酶组成，其各组分的酶活比为：葡萄糖氧化酶12354，叶绿素氧化酶368，类胡萝卜素氧化酶231，蛋白酶36310，烟碱降解酶186；其制备方法如下：选取新鲜烟叶，组织匀浆，酶群经两次(NH4)2SO4分级沉淀纯化后得到粗酶液；将该粗酶液用含0.1％EDTA的缓冲液进行酶金属离子螯合，螯合条件pH8.0，1-5℃，螯合时间10-20min；；然后用0.3％Ca(NO3)2·4H2O和MgSO4进行离子置换，置换条件按粗酶液∶置换溶液1∶0.001体积比反应，1-5℃，置换时间8-12hr或过夜，完成酶分子修饰；经修饰的酶分子，于1-5℃条件下用0.01％蔗糖低聚物进行二次修饰保护，反应时间至少10hr以上；经过这样处理，即可获得所述的用于烟叶发酵的耐高温专用复合酶制剂。
3.权利要求1所述复合酶制剂的使用方法是，成品酶制剂在用蒸馏水稀释为0.4％后，在烟叶打叶复烤前进行二润时均匀喷施，用量200ml/50kg烟叶。
4.权利要求1所述复合酶制剂的用途，其特征是，将权利要求1所述复合酶制剂应用于烟叶发酵。
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