[发明专利]一种检测巯基嘌呤甲基转移酶基因型的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种检测巯基嘌呤甲基转移酶基因型的方法，应用巯基嘌呤甲基转移酶基因多态性位点的特异性引物对样本DNA进行聚合酶链式反应，用限制性内切酶酶切扩增产物，根据酶切片段长度多态性判定基因型，其中引物至少包含检测巯基嘌呤甲基转移酶G460A多态性位点的特异性引物和检测A719G多态性位点的特异性引物。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于聚合酶链式反应程序为：94℃预变性3分钟；94℃变性30秒，55℃-65℃退火45秒，优选退火温度为63℃，72℃延伸30秒，25-35个循环；72℃延伸5-10分钟。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于G460A多态性位点的

正向引物为：5’-CAGCGTAGTTGGTGTGGAAA-3’；

反向引物为：5’-GCGATCACCTGGATTAATGG-3’。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的限制性内切酶为MwoI。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于所述的MwoI的酶使用量是0.5-10U，优选1U，酶切的时间是1-18小时，优选2小时。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于A719G多态性位点的

正向引物为：5’-CACCCAGCCAATTTTGAGTA-3’；

反向引物为：5’-CCTCAAAAACATGTCAGTGTGA-3’。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的限制性内切酶为AccI。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于所述的Accl的酶使用量是0.5-10U，优选1U，酶切的时间是1-16小时，优选1小时。

9.一种利用权利要求1所述的方法检测巯基嘌呤甲基转移酶基因型的试剂盒，含有检测巯基嘌呤甲基转移酶G460A和A719G多态性位点的特异性引物和限制性内切酶MwoI和AccI。

10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于G460A多态性位点的

正向引物为：5’-CAGCGTAGTTGGTGTGGAAA-3’；

反向引物为：5’-GCGATCACCTGGATTAATGG-3’。

11.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于A719G多态性位点的

正向引物为：5’-CACCCAGCCAATTTTGAGTA-3’；

反向引物为：5’-CCTCAAAAACATGTCAGTGTGA-3’。

12.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于所述的AccI的酶使用量是0.5-10U，优选1U；Mwol的酶使用量是0.5-10U，优选1U。

13.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于至少含有巯基嘌呤甲基转移酶G460A多态性位点的野生型质粒DNA和巯基嘌呤甲基转移酶A719G多态性位点的突变型质粒DNA。

14.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于含有DNA抽提试剂、PCR反应混合物、TaqDNA酶、酶切缓冲液和电泳上样缓冲液。

15.如权利要求9-14中任一项所述的试剂盒在检测巯基嘌呤甲基转移酶基因型的用途。

16.如权利要求9-14中任一项所述的试剂盒在预测嘌呤类药物不良反应的用途。

17.如权利要求16所述的用途，其特征在于所述的嘌呤类药物是6-巯基嘌呤、6-巯代鸟嘌呤或巯唑嘌呤。