[发明专利]基因RCS 23

权利要求书

1.选自下述组的多核苷酸或此类多核苷酸的互补链，所述组由：

(a)编码包含根据SEQ ID NO：2的氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)包含根据SEQ ID NO：1的核苷酸序列的多核苷酸；

(c)包含下述核苷酸序列的多核苷酸，所述核苷酸序列可使用来自微生物的基因组DNA作为模板，并使用根据SEQ ID NO：3和SEQ IDNO：4的引物组，通过例如聚合酶链式反应的核酸扩增获得；

(d)多核苷酸，其包含编码被(a)至(c)中任一项的多核苷酸编码的多肽的片段或衍生物的核苷酸序列，其中，在所述衍生物中，一个或多个氨基酸残基较之所述多肽被保守取代，并且，所述片段或衍生物具有PQQ生物合成蛋白的活性；

(e)编码PQQ生物合成蛋白的多核苷酸，其互补链能在严谨条件下与(a)至(d)中任一项所定义的多核苷酸互补；以及

(f)编码PQQ生物合成蛋白的多核苷酸，其与(a)至(d)中任一项所定义的多核苷酸至少70％相同，例如85％、90％或95％相同；

构成。

2.含有权利要求1所述的多核苷酸的载体。

3.如权利要求2所述的载体，其中，所述多核苷酸与允许在原核生物宿主细胞或真核生物宿主细胞中表达的表达控制序列可操作地相连。

4.用权利要求1所述的多核苷酸或用权利要求2或3所述的载体遗传工程改造过的微生物。

5.如权利要求4所述的微生物，其能以300mg/l或更多的量从D-山梨糖醇直接生产维生素C，所述的量是在20小时温育之后以静止细胞方法测量的。

6.如权利要求5所述的微生物，其能以800mg/l或更多的量从L-山梨糖直接生产维生素C。

7.如权利要求1所述的多核苷酸编码的多肽。

8.用于生产能表达权利要求7所述的多肽的细胞的工艺，其包括下述步骤：用权利要求2或3所述的载体或用权利要求1所述的多核苷酸对细胞进行遗传工程改造。

9.权利要求1所述的多核苷酸或用权利要求2或3所述的载体用于生产维生素C的用途。

10.如权利要求9所述的用途，其中所述多核苷酸与表达控制序列可操作地连接，并被引入微生物。

11.如权利要求10所述的用途，其中，所述表达控制序列包含调控序列和/或启动子序列和/或终止子序列，并且，这些序列中的至少一种被改变，所述改变以使得所述微生物对维生素C的生产的产率和/或效率提高的方式进行。

12.如权利要求11所述的用途，其中，所述表达控制序列包含调控序列和/或启动子序列和/或终止子序列，并且，这些序列中的至少一种被改变，所述改变以使得PQQ生物合成蛋白活性增加和/或提高的方式进行。

13.如权利要求4所述的微生物或含有包含权利要求1所述的多核苷酸的内源基因的微生物，所述微生物经过遗传改变，所述改变以使得所述微生物对维生素C的生产的产率和/或效率提高的方式进行。

14.如权利要求13所述的微生物，其生产出具有增加的和/或提高的PQQ生物合成蛋白活性的、权利要求7所述的多肽。

15.如权利要求4-6、13或14中任意一项所述的微生物，其中，根据权利要求1所述的多核苷酸被过量表达。

16.如权利要求4-6、13-15中任意一项所述的微生物，其选自Pseudomonas、Pantoea、Escherichia、Corynebacterium、Ketogulonicigenium以及乙酸细菌，例如Gluconobacter、Acetobacter或Gluconacetobacter，优选地，Acetobacter sp.、Acetobacter aceti、Gluconobacter frateurii、Gluconobacter cerinus、Gluconobacterthailandicus、Gluconobacter oxydans构成的组，优选地，Gluconobacteroxydans，更优选地，Gluconobacter oxydans DSM 17078