[发明专利]用于肿瘤治疗的黄病毒复制子结构

权利要求书

1.黄病毒复制子结构，其包含编码下述内容的核苷酸序列：

(i)不能产生有感染性病毒的黄病毒复制子；和

(ii)粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)。

2.权利要求1的黄病毒复制子结构，其中该核苷酸序列编码的黄 病毒复制子含有所述的复制子的非结构蛋白的一个或多个氨基酸的突 变，缺失或替代，与野生型黄病毒复制子编码的非结构蛋白相比其在 动物细胞中增强IFNα/β的诱导。

3.权利要求2的黄病毒复制子结构，其中所述的非结构蛋白选自 NS2A、NS2B、NS3、NS4A或NS4B。

4.权利要求2的黄病毒复制子结构，其中在所述黄病毒非结构蛋 白中所述的一个或多个氨基酸的突变，缺失或替代选自：

(I)NS2A的第30位丙氨酸突变为脯氨酸；和

(II)NS2A的第101位天冬酰胺突变为天冬氨酸或谷氨酸。

5.权利要求1的黄病毒复制子结构，其编码库京病毒复制子。

6.包含权利要求1的黄病毒复制子结构可操纵地连接一个或多个 调节序列的表达结构。

7.权利要求6的表达结构，其中所述核苷酸序列编码黄病毒复制 子，其具有在所述的复制子的非结构蛋白中的一个或多个氨基酸的突 变，缺失或替代，与野生型黄病毒复制子编码的非结构蛋白相比其增 强IFNα/β的诱导。

8.权利要求7的表达结构，其中所述非结构蛋白选自NS2A、NS2B、 NS3、NS4A或NS4B。

9.权利要求8的表达结构，其中在所述黄病毒非结构蛋白中所述 的一个或多个氨基酸突变，缺失或替代选自：

(I)NS2A的第30位丙氨酸突变为脯氨酸；和

(II)NS2A的第101位天冬酰胺突变为天冬氨酸或谷氨酸。

10.权利要求6的表达结构，其编码库京病毒的复制子。

11.权利要求6的表达结构，其为DNA形式，其中所述的一个或 多个的调节序列包括启动子。

12.权利要求11的表达结构，其促进黄病毒复制子编码RNA的体 外转录。

13.权利要求12的表达结构，其中该启动子是T7或SP6启动子。

14.权利要求6的表达结构，其促进黄病毒复制子编码RNA在动 物细胞中的转录。

15.权利要求10的表达结构，其中该启动子是CMV启动子。

16.权利要求10的表达结构，其中该启动子是可调节的启动子。

17.权利要求16的表达系统，其中该可调节启动子是四环素调 节的启动子。

18.一个表达系统，包括：

(i)根据权利要求6的表达结构；和

(ii)能够表达一个或多个蛋白的包装结构，该蛋白促进所述表达 载体或结构被所述包装细胞包装成黄病毒样颗粒(VLPs)。

19.权利要求18的表达系统，其中该表达结构是RNA形式。

20.权利要求19的表达系统，其中该RNA已经在体外转录。

21.权利要求18的表达系统，其中该表达结构是DNA形式。

22.权利要求18的表达系统，其中该表达结构还包含在所述包装 细胞内的可操纵的启动子，该启动子通过包装细胞促进黄病毒复制子 编码RNA的表达。

23.权利要求22的表达系统，其中该启动子是可调节启动子。

24.权利要求23的表达系统，其中该可调节启动子是四环素调节 启动子。