[发明专利]雷帕霉素的纯化

说明书

发明背景

本发明涉及用于雷帕霉素纯化的化学方法。

雷帕霉素是一种由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)自然产生的大环三烯抗生素。已经有基于其抗肿瘤和免疫抑制作用的一系列申请。用途包括预防或治疗系统性红斑狼疮、肺炎、胰岛素依赖性糖尿病、平滑稽细胞增殖和血管手术后的内膜增厚、成人T-细胞白血病/淋巴瘤、和眼炎。人们仍在继续研究雷帕霉素和雷帕霉素衍生物将其用于这些和其它病症的治疗。

雷帕霉素的异构体是已知的，其具有下列结构，此处称作异构体B和异构体C：

雷帕霉素的常规生产是通过发酵。发酵方法产生含有杂质的低级雷帕霉素，与纯的白色产物相反，低级雷帕霉素常常带有颜色(包括令人讨厌的黄色)。目前的纯化方法需要异丙醇重结晶和/或炭处理方法。通过这些方法获得的产物具有约94％的纯度(基于异构体B和C各纯度的总和)，和约2的黄色指数。常常需要反复重结晶来增加雷帕霉素的纯度，减少黄色指数并增加较低的B∶C异构比(isomeric ratio)，从而满足约23∶1的最小值，结晶后导致产率较低。结果，生产成本仍然较高。

我们需要一种化学纯化方法来增加雷帕霉素的产率，所述雷帕霉素具有足够的纯度且满足临床前和商业使用的质量和管理标准。

发明概述

本发明提供一种作为雷帕霉素纯化的可选择性方法的化学方法。该方法可用于粗雷帕霉素或在异丙醇重结晶过程中从母液回收的次要产物。这些物质通常是深棕色的，具有较低的纯度和较低的B∶C异构比。纯化方法包括用三甲基氯硅烷处理雷帕霉素得到31，42-双-三甲基甲硅烷基醚，庚烷萃取，并使31，42-双-三甲基甲硅烷基醚脱保护从而产生纯化的雷帕霉素产物。

另一方面，使所产生的雷帕霉素缓冲，以便提高药物中B异构体与C异构体之比。

在另一实施方案中，使纯化的雷帕霉素沉淀，过滤收集，洗涤，然后真空干燥得到终产物。

根据下面本发明的详细描述，本发明的其它方面和优点是显而易见的。

发明详述

本发明提供一种用于雷帕霉素纯化的新的化学方法。

此处所用术语“低级”或“粗的”是指雷帕霉素的纯度低于90％，黄色指数大于2，且B∶C异构比(此处也称作异构B∶C比(isomeric ratio))低于20∶1。在其中一个实施方案中，B∶C异构比为13∶1-11∶1。

下一页上的流程1提供纯化方法的概述。在第一步中，将低级雷帕霉素硅烷化，从而形成雷帕霉素31，42-双-O-三甲基甲硅烷基醚(也称作雷帕霉素31，42-双-O-TMS)。该硅烷化反应在US Patent No.6,277,983(Shaw等人)中详细描述。

简单地说，硅烷化是通过在约0℃-约5℃时，在有适宜碱存在的条件下，于惰性溶剂中用三甲基氯硅烷处理粗雷帕霉素而完成的。在其中一个实施方案中，所述溶剂是乙酸乙酯(EtOAc)。在另一实施方案中，硅烷化试剂是三乙基氯硅烷。在其中一个实施方案中，所述碱是咪唑，如咪唑或1-甲基咪唑。然而，在其它实施方案中，三乙胺和N，N-二异丙基乙胺可用作碱。硅烷化之后，通过常规方法过滤该混合物，从而除去废的有机盐和其它深色固体。

在其中一个实施方案中，室温下在庚烷中萃取雷帕霉素31，42-双-O-三甲基甲硅烷基醚，然后使用常规方法，过滤分离深色不溶性杂质。过滤之后，将滤液与炭混合。在其中一个实施方案中，使用DarcoKB炭。然而，可由本领域技术人员选择其它炭，如NucharSA炭或DarcoG-60炭。炭可除去颜色。此外，它可防止在碳酸氢钠洗涤过程中形成乳液。

然后过滤溶液，并使滤液经过一次或多次水和碱性洗涤。在其中一个实施方案中，碱性洗涤是碳酸氢钠。在另一实施方案中，首先用水，然后用饱和碳酸氢钠溶液，然后再用水洗涤滤液。

然后除去有机层并在约25℃-约30℃下减压浓缩，得到浅黄色泡沫。将该泡沫溶于适宜溶剂中并冷却至约0℃-约5℃。在其中一个实施方案中，溶剂是丙酮。在其它实施方案中，溶剂是四氢呋喃、乙腈或乙酸。其它适宜溶剂可由本领域普通技术人员选择。

然后使用适宜的酸除去萃取过的雷帕霉素31，42-双-O-TMS的甲硅烷基，即使雷帕霉素31，42-双-O-TMS脱保护，从而产生雷帕霉素。在其中一个实施方案中，所用酸是硫酸。在另一实施方案中，硫酸为0.5N硫酸。