[发明专利]Ljungan病毒的检测方法

权利要求书

1.一种检测LV的方法，包括检测一段核酸序列，所述核酸序列包括序列：

CTGCRYAGGTGGCTTTCACCTCTSGACAGYGC(SEQ ID NO.1)或其反向互补序列中的至少13个连续的核苷酸。

2.根据权利要求1的方法，其中所述待检测的核酸序列是一段RNA序列。

3.根据权利要求1的方法，其中所述待检测的核酸序列是一段DNA序列。

4.根据权利要求1的方法，包括将LV RNA反转录成cDNA的起始步骤。

5.根据前述权利要求任一项的方法，其中所述被检测的核酸序列包括SEQID NO.1或其反向互补序列中的至少15个连续的核苷酸。

6.根据前述权利要求任一项的方法，其中所述被检测的核酸序列包括SEQID NO.1或其反向互补序列中的至少17个连续的核苷酸。

7.根据前述权利要求任一项的方法，其中所述被检测的核酸序列包括以下序列：GCTTTCACCTCTSGACA(SEQ ID NO.3)或其反向互补序列。

8.根据前述权利要求任一项的方法，其中使用至少一个带标记的探针检测所述核酸序列，所述的标记探针能与SEQ ID NO.1或其反向互补序列的至少13个连续的核苷酸特异性地杂交。

9.根据权利要求8的方法，其中所述带标记的探针的长度小于25个核苷酸。

10.根据权利要求8的方法，其中所述带标记的探针的长度为17个核苷酸或更小。

11.根据权利要求8-10中任一项的方法，其中所述带标记的探针结合到所述被检测核酸的小沟。

12.根据权利要求8-11中任一项的方法，其中所述探针为单链DNA探针。

13.根据权利要求8至11中任一项的方法，其中所述探针为外切核酸酶探针。

14.根据权利要求4的方法，其中一段DNA引物退火至所述RNA序列的某个位置，使得能够产生一段包括SEQ ID NO.1中的至少13个连续的核苷酸的DNA序列，并且所述引物通过反转录酶的作用进行延伸。

15.权利要求14的方法，其中所述引物具有如下序列：

GCCCAGAGGCTAGTGTTACCA(SEQ ID NO.9)。

16.根据权利要求1的方法，包括：

(a)反转录LV RNA，从而得到一段包括SEQ ID NO.1中的至少13个连续的核苷酸的DNA序列；

(b)扩增所述DNA序列；并且

(c)检测所述扩增出的DNA序列的存在。

17.根据权利要求16的方法，其中用探针检测所述扩增出的DNA序列。

18.根据权利要求16或17的方法，其中用聚合酶链反应(PCR)扩增所述DNA序列。

19.根据权利要求18的方法，其中所述用于PCR反应的引物能扩增出一段包括SEQ ID NO.1中的至少13个连续的核苷酸的DNA序列。

20.根据权利要求19的方法，其中所述引物包括：

一段正向引物，包括序列：TAGGGGCTGTACCCGGGCGGTCCCACTCTTCACAG(SEQ ID NO.7)或其中至少13个连续的核苷酸；并且一段反向引物，包括序列：

CCCCTAGTGGTAACACTAGCCTCTGGGCCCAAAAGGCATGTC(SEQ ID NO.8)或其中至少13个连续的核苷酸。

21.根据权利要求20的方法，其中所述正向引物具有如下序列：

GCGGTCCCACTCTTCACAG(SEQ ID NO.12)。

22.根据权利要求20或21的方法，其中所述反向引物具有如下序列：

TGGTAACACTAGCCTCTGGGC(SEQ ID NO.9)。

23.根据权利要求18至22中任一项的方法，其中进行定量PCR。