[发明专利]用于LPS脱毒的多粘菌素B类似物

说明书

本发明涉及用于LPS脱毒的多粘菌素B的肽类似物。在药学领域，这些肽类似物(i)本身可用于治疗致死性疾病，如由革兰氏阴性细菌感染所致的败血症性休克；或(ii)可以与LPS非共价地结合，因而使LPS脱毒；该肽类似物与LPS的复合体用作抗革兰氏阴性细菌感染的疫苗药物。

脂多糖(LPS)是革兰氏阴性细菌的细胞壁外膜的主要成分。LPS对于哺乳动物、特别是人类是强毒性的，并且就其生物学活性而言称作内毒素。它导致败血症性休克中由内毒素中毒引起的结果，败血症性休克是在革兰氏阴性细菌所致的急性感染(败血症)时发生的致命事件。

LPS结构由称作脂质A的脂质部分共价连接于多糖部分构成。

脂质A是LPS毒性效应的原因，尤其通过与B细胞及巨噬细胞相互作用导致毒性效应。这种相互作用诱导促炎细胞因子分泌。炎性病症可达到内毒素性休克的致命状态。

脂质A是高度疏水的并且固定LPS于细菌细胞壁外层内。脂质A由具有(ii)脂肪酸的(i)保守的二磷酸化二糖区域(最经常地是N，O-酰基β-1，6-D-葡糖胺1，4′-二磷酸酯)组成，其中所述的脂肪酸取代属于二糖羟基的不同氢原子。脂肪酸的数目及其组成是种间可变的。例如，脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis)脂质A的两个对称性葡糖胺(GlcN1和GlcN2)的每一个均携带如下脂肪酸：2N-C14，3OH；C12和3O-C12，3OH。

LPS多糖部分由引起抗原性的糖链构成。糖链结构本身包含(i)称作KDO(2-酮，3-脱氧辛酮糖酸)区的结合于脂质A的保守内核和(ii)通常定义为包括各种糖的结合于KDO区的可变外核，以及(iii)外部O-特异性链的第一重复单元(其可以包含多达10个糖)。

在革兰氏阴性的非肠内细菌如奈瑟氏菌属(Neisserias)、鲍特氏菌属(Bordetellas)、嗜血杆菌属(Haemophilus)和莫拉氏菌属(Moraxellas)中不存在O-特异性链(所定义的第一重复单元实际上不重复)。因此常常将这些细菌的LPS称作脂寡糖(LOS)。

LPS不仅有毒，而且免疫原性高。在哺乳动物中，抗LPS抗体在感染和携带期间被诱导，并且该抗体是保护性抗体。鉴于此，已经建议使LPS脱毒并将其脱毒的形式用于预防革兰氏阴性细菌感染和相关疾病。

数种脱毒方法已经是已知的。尤其有可能在使用多粘菌素B或更适当地在使用其肽类似物时使LPS脱毒。

多粘菌素B是以高亲和力结合脂质A以使LPS显著脱毒的分子。当在动物模型中治疗性给予时，多粘菌素B可以预防败血症性休克，然而多粘菌素B是可能对人有某种程度毒性的聚阳离子抗生素，其原因是多粘菌素B的生物不可降解性和随之而来的肾脏内蓄积倾向。因此在预防性或治疗性产品中不推荐使用它。

为克服这种限制，已经开发多粘菌素B的肽类似物。这些肽类似物不保留多粘菌素B的毒性，而仅模拟多粘菌素B的一级结构和二级结构并在如多粘菌素B结合的相同位点结合脂质A，以形成LPS-肽复合体。因此，LPS被脱毒。肽类似物具体描述于US 5,358,933、WO 93/14115、WO 95/03327、WO 96/38163，EP 842 666和EP 976402。肽类似物之一，式KTKCKFLKKC的环状单体SAEP2(合成抗内毒素肽2)已经得到更细致地研究(Rustici等，1993，Science 259：361和Velucchi等，1997，J.Endotox.Res.4(4)：261)。

现已发现SAEP2肽以及相似的肽(下文中统称作SAEP II肽)在它们处于二聚体形式时尤其有意义，其中所述的肽在其序列中包含大量的不带电荷的极性氨基酸，所述极性氨基酸由两个邻近的半胱氨酸残基环绕，并由阳离子氨基酸组成的外部短尾所平衡，所述二聚体的构象由半胱氨酸残基间的一对二硫键形成并由其维持。实际上，SAEP II肽二聚体表现出胜过相应单体的增强的脱毒特性。

因此，本发明涉及式(I)的SAEP II肽二聚体

NH₂-A-Cys1-B-Cys2-C-COOH

NH₂-A′-Cys1-B′-Cys2-C′-COOH

其中两个Cys1残基经二硫键连接在一起并且两个Cys2残基经二硫键连接在一起；

或式(II)的SAEP II肽二聚体

NH₂-A-Cys1-B-Cys2-C-COOH