[发明专利]用于测定糖蛋白Ibα(GPIBα)蛋白质的方法

权利要求书

1.检测生物学样品内GPIbα存在的方法，包括：(a)提供包含GPIbα的物质；(b)使来自步骤(a)的物质与结合GPIbα的结合蛋白接触；(c)添加对GPIbα特异的检测化合物；(d)添加结合来自步骤(b)的结合蛋白的复合物；和(e)检测来自步骤(c)的检测化合物，其中阳性检测信号预示着生物学样品内存在GPIbα。

2.权利要求1所述的方法，其中包含GPIbα的生物学样品是血浆。

3.权利要求2所述的方法，其中血浆来自哺乳动物。

4.权利要求3所述的方法，其中哺乳动物是人。

5.权利要求1所述的方法，其中包含GPIbα的生物学样品来自细胞系的上清液。

6.权利要求5所述的方法，其中细胞系是CHO细胞系。

7.权利要求1所述的方法，其中检测化合物包含抗体。

8.权利要求7所述的方法，其中检测化合物包含Fab片段。

9.权利要求1所述的方法，其中结合蛋白包含具有与权利要求7所述抗体的结合位点不同的结合位点的蛋白质。

10.权利要求9所述的方法，其中结合蛋白是冯·维勒布兰德因子(vWF)的片段。

11.权利要求10所述的方法，其中片段是vWF的A1结构域。

12.权利要求9所述的方法，其中结合蛋白是完整的vWF蛋白。

13.权利要求1所述的方法，其中结合蛋白是经生物素酰化的。

14.权利要求11所述的方法，其中vWF的A1结构域是经His-标记的。

15.权利要求13所述的方法，其中完整的vWF是经生物素酰化的。

16.权利要求1所述的方法，其中与结合蛋白结合的复合物是链亲和素包被的磁珠。

17.权利要求1所述的方法，其中与结合蛋白结合的复合物是抗His抗体包被的磁珠。

18.权利要求7所述的方法，其中对GPIbα特异的检测化合物用化学发光物质标记。

19.权利要求8所述的方法，其中对GPIbα特异的Fab片段用化学发光物质标记。

20.权利要求1所述的方法，其中对步骤(e)内的检测化合物的检测还包括使化学发光物质暴露于光下并测量化学发光物质的激发。

21.测量生物学样品内GPIbα的蛋白质浓度的方法，包括：(a)提供包含GPIbα的物质；(b)使来自步骤(a)的物质与结合GPIbα的结合蛋白接触；(c)添加对GPIbα特异的检测化合物；(d)添加结合来自步骤(b)的结合蛋白的复合物；和(e)检测来自步骤(c)的检测化合物，其中与已知标准曲线相比较的检测信号预示着生物学样品内GPIbα的蛋白质浓度。

22.权利要求21所述的方法，其中对检测化合物的检测还包括使化学发光物质暴露于光下并测量化学发光物质的激发，与已知标准曲线相比较的激发预示着GPIbα的蛋白质浓度。

23.检测生物学样品内GPIbα的结合活性的方法，包括：(a)提供包含GPIbα的物质；(b)使来自步骤(a)的物质与结合GPIbα的结合蛋白接触；(c)添加对GPIbα特异的检测化合物；(d)添加结合来自步骤(b)的结合蛋白的复合物；(e)检测来自步骤(c)的检测化合物，其中与已知标准曲线相比较的检测信号预示着生物学样品内GPIbα的蛋白质浓度；和(f)计算GPIbα的结合活性。

24.权利要求23所述的方法，其中(f)的结合活性X通过(A/B)×100％计算，其中A是通过vWF相互作用对GPIbα所测定的蛋白质浓度，并且B是通过A蛋白HPLC或Fc捕获免疫测定法测定的蛋白质浓度。