[发明专利]用于测定糖蛋白Ibα(GPIBα)蛋白质的方法

说明书

相关申请的交叉参考

本申请要求于2005年4月22日提交的美国临时申请系列号60/673,926(在本文中完整引用作为参考)的优先权。

发明领域

本发明处于生物化学测定系统、特别是用于测量蛋白质的生物化学测定系统领域内。更具体地，本发明涉及检测并定量糖蛋白Ibα(GPIbα)蛋白质。

发明背景

在血管生物学中，血小板功能是正常的止血和血栓形成的基础。血小板通过保持血管完整性和控制损伤后的出血而对维持正常血液循环作出贡献(Ruggeri，J.Clin.Invest.99：559-564(1997))。尽管血小板栓的形成是存活所需要的防御机制，然而，它还可能促成了疾病如心肌梗死，尤其在动脉粥样硬化微环境下(Fuster，N.Engl.J.Med.326：242-250(1992))。此外，发达国家中发病率和死亡率的一个主要原因是急性血栓形成性动脉闭塞(Ruggeri，J.Clin.Invest.99：4559-564(1997))。这凸显以揭示血小板对血管损伤的应答机制、以及检测该复杂途径中成分的商业方法为中心的研究的意义。

血小板的受体复合体即糖蛋白(GP)Ib/IX/V在血小板应答机制中是重要的。这种血小板受体直接与形成至受损血管壁的桥的冯·维勒布兰德因子(vWF)结合(Miura，J.Biol.Chem.275：7539-7546(2000))。该效应通过vWF与内皮下基质结合而触发并受到微血管内血流所提供剪切应力的调节(Turitto，Blood 65：823-829(1985))。该事件进一步导致来自受损血管壁的胶原受体与血小板相互作用，引起血小板激活、血小板聚集并且形成封闭内皮溃疡和阻止血液渗漏的止血栓(Girma，Blood 70：605-615(1987))。

与vWF-胶原基质结合的血小板受体GPIb/IX/V由四个亚基即GPIbα、GPIbβ、GPIX和GPV组成(Modderman，J.Biol.Chem.267：364-369(1992))。基于其功能及大小，这些亚基中最重要的亚基是150-kDa GPIbα链(Uff，J.Biol.Chem.277：35657-35663(2002))。GPIbα负责通过与vWF的A1-结构域上的多个位点结合而初始黏附至vWF。在GPIbα内的突变可以引起出血性病症、贝-苏综合征(BSS)和vWF维勒布兰德病(Pt-vWD)。vWF是GPIbα的主要配体，与此同时已经鉴定与该糖蛋白结合的其它蛋白质，包括凝血酶、激肽原、因子XI、因子XII、P-选择素和Mac-1(Uff，J.Biol.hem.277：35657-35663(2002))。

GPIbα的生物学重要性是显而易见的，并且因此对简单的、判定性生物学测定法以鉴定并定量GPIbα的需要变得迫切。目前定量GPIbα的可用生物学测定法费时、费力、受限于某些同种型并且操作成本昂贵。体内(in vivo)方法包括大鼠尾静脉出血模型和狗Folts动物模型，而瑞斯托菌素诱导的血小板凝集测定(RIPA)构成目前可用的体外(in vitro)测定法(Folts，Circulation 83：IV3-IV14(1991)，Dejana，Thromb.Haemost.48：108-111(1982)，Weiss J.Clin.Invest.2：2708-16(1973))。这些测定法伴有背景噪音高、灵敏性有限、成本高、需要大量劳动力，并且具有明显的测定间变异性。因此，需要可以精确而迅速地在数种生物学样品类型内检测并定量大范围水平的GPIbα的测定系统。更具体地是可以在研究实验室环境下以及在临床和诊断场所内精确而高效地测量GPIbα的方法。具备简单、精确并高度可重复性地检测GPIbα的生物学活性的新方法非常受欢迎。

本发明满足了这些要求并且还提供相关的优点。本发明的其它目的和优点将部分地在后续描述内叙述，并且将部分地自此描述中显而易见，或可以通过实施本发明获知。本发明的目的和优点将通过在所附带权利要求书中特别提出的组成部分和组合加以实现。

应当理解，如所要求那样，在先的一般描述及随后的详细描述仅是示例性和解释性的，并且不限制本发明。

发明简述