[发明专利]化学治疗应答者的确定

权利要求书

1.一种确定包含人肺癌细胞的生物样品是否对表皮生长因子受体抑制剂和化学治疗剂的组合敏感的方法，所述方法包括：

测定磷酸化AKT蛋白和/或磷酸化MAPK蛋白在所述生物样品中的过量表达，

由此所述磷酸化AKT蛋白和/或磷酸化MAPK蛋白的过量表达是所述包含人肺癌细胞的生物样品对表皮生长因子受体抑制剂和化学治疗剂的组合敏感的指示。

2.按照权利要求1的方法，其中所述磷酸化AKT蛋白和/或磷酸化MAPK蛋白在所述生物样品中的过量表达通过下列步骤测定：

a)测定所述生物样品中磷酸化的AKT蛋白和/或磷酸化的MAPK蛋白的表达水平，

b)测定在包含对表皮生长因子抑制剂和化学治疗剂的组合不敏感的人肺癌细胞的生物样品中磷酸化的AKT蛋白和/或磷酸化的MAPK蛋白的表达水平，

c)测定在步骤a)和b)中测定的磷酸化的AKT蛋白和/或磷酸化的MAPK蛋白的表达水平的差异，由此确定磷酸化的AKT蛋白和/或磷酸化的MAPK蛋白的过量表达。

3.按照权利要求2的方法，其中步骤a)和b)中测定的磷酸化的AKT蛋白和/或磷酸化的MAPK蛋白的表达水平的差异为至少10％。

4.按照权利要求2-3中任一项的方法，其中步骤a)和b)中测定的磷酸化的AKT蛋白和/或磷酸化的MAPK蛋白的表达水平的差异为至少25％。

5.按照权利要求1-4中任一项的方法，其中所述生物样品是原发性肺肿瘤或转移瘤。

6.按照权利要求1-5中任一项的方法，其中EGFR抑制剂是erlotinib或N-(3-乙炔基苯基)-6，7-二(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺。

7.按照权利要求1-6中任一项的方法，其中所述化学治疗剂是吉西他滨或顺铂。

8.按照权利要求1-7中任一项的方法，其中所述磷酸化的Akt蛋白或磷酸化的MAPK蛋白的过量表达是使用特异性结合磷酸化蛋白的试剂测定的。

9.权利要求8的方法，其中抗体、抗体衍生物或抗体片段特异性地结合所述磷酸化的AKT蛋白或磷酸化的MAPK蛋白。

10.按照权利要求1-9中任一项的方法，其中所述磷酸化的AKT蛋白是在与Akt1蛋白氨基酸位置473对应的氨基酸位置被磷酸化，或者所述MAPK蛋白在与MAPK1氨基酸位置202和204对应的氨基酸位置被磷酸化。

11.按照权利要求1-11中任一项的方法，其中MAPK蛋白的氨基酸序列为氨基酸序列SEQ ID NO：1或2，AKT蛋白的氨基酸序列是氨基酸序列SEQ ID NO：6，7或8。

12.按照权利要求1-11中任一项的方法，其中表达水平是应用选自由下列各项组成的组的方法进行测定：蛋白质组学、流式细胞术、免疫细胞化学、免疫组织化学和酶联免疫吸附测定。

13.按照权利要求1-12中任一项的方法，其中磷酸化的AKT蛋白和/或磷酸化的MAPK蛋白的过量表达通过下列步骤测定：

a)将所述生物样品进行免疫组织化学染色，

b)在肉眼观察生物样品中细胞的染色后，对于所述磷酸化的AKT蛋白和/或磷酸化的MAPK蛋白的表达水平，指定一个选自数字1，2，3和4的等级，由此指定关于表达水平的最高可检测等级，

c)确定在免疫组织化学染色的生物样品中具有最高可检测等级的细胞的百分比，

d)将在免疫组织化学染色的生物样品中具有最高可检测等级的细胞的百分数乘以指定的等级并且乘以100，和

e)当步骤d)的乘法结果高于100时，确定所述生物样品中磷酸化的AKT蛋白和/或磷酸化的MAPK蛋白过量表达。

14.结合磷酸化AKT蛋白的抗体或结合磷酸化MAPK蛋白的抗体的应用，其用于确定包含人肺癌细胞的生物样品是否对表皮生长因子抑制剂和化学治疗剂的组合敏感。