[发明专利]测量全血中的凝血酶活性

权利要求书

1.体外检测样品中凝血酶活性的方法，其中所述样品为血液样品，且通过以下步骤测量凝血酶的生成：

-将所述样品层与凝血酶的荧光底物接触，其中所述层具有0.05至5mm范围的厚度和10至500mm²范围的表面；

-使得在所述样品中产生凝血酶；

-测量从所述层的表面由荧光底物释放的荧光团所发出的荧光，该释放是生成的凝血酶对所述的荧光底物的酶促作用的结果。

2.根据权利要求1所述的方法，其中测定中生成的凝血酶浓度被确定为测量到的释放的荧光基团荧光的函数。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中全血样品最大被稀释10倍。

4.根据权利要求1至3中任一权利要求所述的方法，其中样品层的厚度约2mm或更小。

5.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的方法，其中，将血液样品填充于板的孔中用于测定，所述孔中还含有筛孔大小为50-500μm的栅格。

6.根据权利要求1至5中任一权利要求所述的方法，其中，将血液样品填充于还含有微珠的板孔中用于测定。

7.根据权利要求1至6中任一权利要求所述的方法，其中含有血液样品的孔被覆盖以测定凝血酶活性。

8.根据权利要求1至7中任一权利要求所述的方法，其中向凝血酶荧光底物中加入荧光团，其中加入的荧光团的各自比例为结合在凝血酶底物上荧光分子数量的1％至10％。

9.根据权利要求1至8中任一权利要求所述的方法，其中加入样品中的凝血酶荧光底物的量在50-1000μM的范围内。

10.根据权利要求1至8中任一权利要求所述的方法，其中所述荧光底物为与荧光分子偶联的凝血酶的合成底物。

11.根据权利要求10所述的方法，其中凝血酶底物被凝血酶选择性水解，与凝血酶有中等结合亲和力和低动力学常数。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述荧光底物是与荧光分子偶联的具有2至30个氨基酸残基序列的寡肽。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述寡肽具有末端赖氨酸或精氨酸残基用于与荧光分子偶联。

14.根据权利要求10至13中任一权利要求所述的方法，其中所述荧光分子为AMC(7-氨基-4-甲基香豆素)。

15.根据权利要求1至14中任一权利要求所述的方法，其中所述孔还含有凝胶，可能含有钙离子，其中所述凝胶不稀释血液样品。

16.根据权利要求1至15中任一权利要求所述的方法，其中将组织因子及钙离子以使得凝血酶生成能够发生的量加入至血液样品中。

17.根据权利要求1至15中任一权利要求所述的方法，其中所述血液样品为全血。

18.根据权利要求1至15中任一权利要求所述的方法，其中所述血液样品为血浆样品，特别是富含血小板的血浆(PRP)。

19.根据权利要求17所述的方法，其中所述全血样品含柠檬酸盐。

20.根据权利要求1至19中任一权利要求所述的方法，其用于检测或监测止血性疾病或血栓形成性疾病。

21.根据权利要求20所述的方法，其用于检测或监测已确定物质对全血样品中凝血酶活性的相互作用，其中向待测定样品中加入所述的已确定物质或在凝血酶生成期间加入所述的已确定物质。

22.根据权利要求20所述的方法，其用于监测凝血因子或药物的相互作用。

23.根据权利要求20所述的方法，其用于筛选物质以确定其与凝血酶生成的相互作用能力。

24.根据权利要求1至20中任一权利要求所述的方法，其用于测量全血样品的内源性凝血酶潜能(ETP)。

25.根据权利要求1至21中任一权利要求所述的方法，其用于测量凝血酶达到峰值的时间。

26.根据权利要求1至22中任一权利要求所述的方法，其用于测量凝结时间。