[发明专利]利用HCIC和离子交换层析的蛋白质纯化

权利要求书

1.一种纯化包含目标蛋白质和一种或多种污染物的混合物的方法，包括(a)将该混合物进行离子交换层析步骤和疏水电荷诱导层析步骤，其中没有过程中切向流过滤步骤，和(b)分离目标蛋白质。

2.一种纯化包含目标蛋白质和一种或多种污染物的混合物的方法，所述混合物已经进行了疏水电荷诱导层析，该方法包括(a)将该混合物进行阳离子交换层析步骤，其中没有过程中切向流过滤步骤，和(b)分离目标蛋白质。

3.一种纯化包含目标蛋白质和一种或多种污染物的混合物的方法，所述混合物已经进行了离子交换层析，该方法包括(a)将该混合物进行疏水电荷诱导层析步骤，其中没有过程中切向流过滤步骤，和(b)分离目标蛋白质。

4.一种纯化混合物的方法，所述混合物包含目标蛋白质和选自宿主细胞蛋白质和核酸的污染物，该方法包括将该混合物进行阳离子交换层析和疏水电荷诱导层析，并分离目标蛋白质至纯度为大约每百万份100份(ppm)或更少的宿主细胞蛋白质和大约10pg/mg或更少的核酸。

5.权利要求1-4的方法，进一步包括病毒灭活步骤。

6.权利要求5的方法，其中所述病毒灭活步骤是过程中步骤。

7.权利要求1-4的方法，其中所述混合物由细胞培养上清液制备。

8.权利要求1、2或4的方法，其中所述阳离子交换层析在pH3到10的范围内进行。

9.权利要求1、2或4的方法，其中所述阳离子交换层析在pH4.0到8.0的范围内进行。

10.权利要求1、3或4的方法，其中所述疏水电荷诱导层析在pH3到10的范围内进行。

11.权利要求1、3或4的方法，其中所述疏水电荷诱导层析利用pH4.0到9.0的范围进行。

12.权利要求1、2或4的方法，其中在pH3到9并且电导率为0.1到40mS/cm的条件下，所述目标蛋白质与阳离子交换层析柱结合。

13.权利要求1、2或4的方法，其中在pH4.0到8.0并且电导率为0.5到10mS/cm的条件下，所述目标蛋白质与阳离子交换层析柱结合。

14.权利要求1、3或4的方法，其中在pH5到10并且电导率为0到90mS/cm的条件下，所述目标蛋白质与疏水电荷诱导层析柱结合。

15.权利要求1、3或4的方法，其中在pH6到9并且电导率为2到9mS/cm的条件下，所述目标蛋白质与疏水电荷诱导层析柱结合。

16.权利要求1、2或4的方法，其中所述目标蛋白质与阳离子交换层析柱结合，并且利用pH为3到9且电导率为0.1到40mS/cm的清洗缓冲液清洗层析柱。

17.权利要求1、2或4的方法，其中所述目标蛋白质与阳离子交换层析柱结合，并且利用pH为4.0到8.0且电导率为0.5到10mS/cm的清洗缓冲液清洗层析柱。

18.权利要求1、3或4的方法，其中所述目标蛋白质与疏水电荷诱导层析柱结合，并且利用pH为5到10且电导率为0到90mS/cm的清洗缓冲液清洗层析柱。

19.权利要求1、3或4的方法，其中所述目标蛋白质与疏水电荷诱导层析柱结合，并且利用pH为6到9且电导率为0.1到9mS/cm的清洗缓冲液清洗层析柱。

20.权利要求1，2或4的方法，其中在pH3到10和电导率为0.1到40mS/cm的条件下，所述目标蛋白质从阳离子交换层析柱上洗脱下来。

21.权利要求1、2或4的方法，其中在pH4.0到8.0和电导率为5到15mS/cm的条件下，所述目标蛋白质从阳离子交换层析柱上洗脱下来。

22.权利要求1、3或4的方法，其中在pH3.0到7.0和电导率为0到20mS/cm的条件下，所述目标蛋白质从疏水电荷诱导交换层析柱上洗脱下来。

23.权利要求1、3或4的方法，其中在pH4.0到6.0和电导率为0.1到2.0mS/cm的条件下，所述目标蛋白质从疏水电荷诱导交换层析柱上洗脱下来。