[发明专利]两步侧向流测定方法和设备

说明书

技术领域

本发明涉及用于检测样本内特定结合对的第一成员的两步侧向流测定方法和设备。方法和设备特别地有利于检测样本内的特定结合对的第一成员，该样本包含了多个非特定结合对成员。在特定的实施例中，方法和设备有利于识别样本内特定的IgE抗体。

背景技术

在本领域中已知许多侧向流测定设备和方法。典型地，设备和方法允许将样本施加到侧向流基质。样本沿侧向流基质流动且样本内的一个或多个待检测的分析物成分与至少一个提供在或添加到侧向流基质内的试剂反应。至少一个试剂典型地固定在设备内以与待检测的分析物成分或其试剂反应，且典型地使用标记以测量与固定试剂的反应程度。

例如，Dafforn等人的美国专利No 4,981,786披露了用于捕获在区内的特定结合对的第一成员，且允许由毛细作用将液体从区移开的测定设备。添加了例如包括特定的结合对成员、信号产生系统的成员、附属试剂等的用于进行测定的液体试剂。Dafforn等人披露了他们的测定设备和方法的特定的使用，以用于检测人类绒毛膜促性素(HCG)的存在。

为便于由实验室人员和非实验室医疗人员和消费者使用侧向流测定设备，例如在“护理点”应用中使用，且为获得更快的检测技术，已很关注于改进单步测定设备和方法。例如，May等人的美国专利No5,602,040、No 5,622,871、No 5,656,503、No 6,187,598和No 6,228,660披露了设备、套件和方法，它们便于单步侧向流测定方法。测试条提供有干燥的标记试剂，该标记试剂通过液体生物样本释放为移动形式。标记试剂特别地与待检测的分析物结合以形成络合物，且液体样本沿侧向流基质的迁移将络合物通过毛细作用运送到检测区。

Hubscher等人的美国专利No 6,528,325披露了更特定的设备和方法以通过使用便于单步技术的侧向流测定来检测人体血清中的抗体。从体液获得的测试样本与金标记抗原反应，且作为结果的络合物越过膜且沿侧向流条行进。形成在沿测试条的特定位置处的红线指示了测试样本中类型特定的抗体的存在。在由Hubscher等人披露的更特定的实施例中，侧向流测定用作免疫色谱筛选测试，以检测人血清内的过敏原特异性IgE抗体。测试样本与金标记抗IgE抗体反应，且作为结果的络合物越过膜行进，在膜处固定的过敏原捕获过敏原特定IgE络合物。在测试区内形成彩色线以指示过敏原特定IgE抗体的存在。

检测个体内特定的过敏原是重要的，以允许医疗人员进行安全和有效的过敏治疗。通常的用于过敏检测的技术典型地涉及皮肤刺测试，以将个体暴露于多种过敏原和/或涉及复杂和昂贵的实验室测试。由于通常使用的技术的损伤、成本和/或不便性，许多医疗人员仅基于个体的症状进行过敏治疗而不进行测试以确定个体可能具有何种特定的过敏原。这样的处置明显地可能是危险的、浪费的和/或无效的，因为可能为个体进行了对其过敏情况不合适的治疗药品。因此，使用侧向流测定技术来检测个体的IgE抗体用于准确诊断个体的过敏可能是有利的。然而，特定的IgE抗体的检测经常是困难的。即例如血液的生物样本包含多个干扰为精确标记和检测特定的IgE抗体所需的反应的非特定性结合成员。

更特定地，特定的过敏确定要求识别具有可变的结合到特定的过敏原的抗原决定基的区域的IgE抗体。体液典型地包含数千个具有不同的IgE可变区域特异性的抗体，且因此通过测定确定特定的过敏要求从数千个IgE抗体特异性的单个抗体类型的选择性反应。检测共轭物容易地结合到这样的IgE抗体的恒定区域，即检测共轭物典型地不区分不同的IgE特异性，且使用常规的测定和标记技术则特定的IgE抗体的识别是困难的。实际上，已难于使用如在现有技术中披露的技术进行侧向测定来容易地为诊断过敏识别个体的IgE。典型地，使用在测定中结合到IgE抗体的非可变区域的检测共轭物而基于限制在固相上的过敏原的免疫测定将对于测定中的IgE非特定结合敏感。因此，存在对于改进的测定设备和方法的需要，特别是对于便于特定的IgE抗体的检测的需要。

发明内容

因此，本发明的目的是提供改进的侧向流测定设备和方法。相关的目的是提供有利地用于对于检测特定的IgE抗体且因此可以帮助诊断个体内的过敏的侧向流测定设备和方法。