[发明专利]制备和分离磷脂的方法

权利要求书

1.制备下式磷脂酰丝氨酸的方法

其中R¹和R²独立地表示饱和的、单不饱和的或多不饱和的酰基C₁₀-C₃₀，X＝OH或OM，其中M＝碱或碱土金属、铵、烷基铵(包括内盐)，该方法包括以下通式的磷脂酰胆碱与D、L或外消旋形式的丝氨酸之间的转磷脂酰化反应

其中R¹和R²以及X具有上述特别的含义，并且R³＝CH₂-CH₂-NH₂或CH₂-CH₂-N⁺(CH₃)₃，该反应是通过磷脂酶D酶(PLD)催化的，

其特征在于所述的反应是在包含脂族醇的含水醇介质中并且在二价金属氧化物的存在下进行的。

2.权利要求1的方法，其特征在于所述的反应是在包含非质子极性溶剂的介质中并且在二价金属氧化物的存在下进行的。

3.权利要求1的方法，其特征在于所述的反应是在包含水/有机溶剂形成的两相体系的介质中并且在二价金属氧化物的存在下进行的。

4.权利要求1的方法，其中脂族醇选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇。

5.权利要求4的方法，其中脂族醇是异丙醇，其浓度在0.1至50％之间，以占起始缓冲液体积的％体积表示。

6.权利要求5的方法，其中异丙醇的浓度是10％。

7.权利要求2的方法，其中非质子极性溶剂选自二甲亚砜、乙腈、二甲基甲酰胺和N-甲基-吡咯烷酮。

8.权利要求7的方法，其中非质子极性溶剂是二甲亚砜，其浓度在0.1至50％之间，以占起始缓冲液体积的％体积表示。

9.权利要求8的方法，其中二甲亚砜的浓度是1.25％。

10.权利要求3的方法，其中有机溶剂选自正己烷、甲苯、苯和正丁醇。

11.权利要求10的方法，其中有机溶剂是正己烷，其浓度在0.1至40％之间，以占起始缓冲液体积的％体积表示。

12.权利要求11的方法，其中正己烷的浓度是1.25％或2.5％。

13.前述权利要求的方法，其中二价金属氧化物是钙或镁或锌的氧化物，其浓度在0.1至1M之间。

14.权利要求13的方法，其中所选的氧化物的浓度是0.33或0.54M。

15.权利要求1-3的方法，其中丝氨酸的浓度范围在1至5gg/gg磷脂酰胆碱之间。

16.权利要求15的方法，其中丝氨酸的浓度范围在2至3gg/gg磷脂酰胆碱之间。

17.权利要求1-3的方法，其中磷脂酰胆碱是以纯化形式或作为原料存在的动物和/或植物来源的天然的或合成的，其起始浓度在10至500mg/mL之间，优选在200至300mg/mL之间。

18.所有前述权利要求的方法，其中转磷脂酰化反应是在温度为20℃至60℃之间并且优选在45℃下发生的。

19.所有上述权利要求的方法，其中转磷脂酰化反应是在温度为20℃至60℃之间并且优选在55℃下发生的。

20.所有前述权利要求的方法，其中酶PLD是衍生自微生物Streptoverticillium hachijoense的发酵来源的酶，该酶以纯化的、部分纯化的或未纯化的形式使用。

21.权利要求20的方法，其中所用的PLD的浓度在1至100单位/g磷脂酰胆碱之间不同。

22.权利要求21的方法，其中所用的PLD的浓度在1至10单位/g磷脂酰胆碱之间不同。