[发明专利]高亲和力Melan－A T细胞受体

说明书

本发明涉及具有结合AAGIGILTV-HLA-A*0201特性并含有至少一个TCRα链可变区和/或至少一个TCR β链可变区的T细胞受体(TCR)，其特征在于，所述TCR对所述AAGIGILTV-HLA-A*0201复合物的K_D小于或等于3μM和/或解离速率(k_off)为1×10^-3S^-1或更慢。

发明背景

AAGIGILTV肽衍生自由大多数黑色素瘤新鲜样品和约60％黑色素瘤细胞系以及正常黑色素细胞所表达的Melan-A(Mart-1)蛋白(Coulie等，(1994)J.Exp.Med.180：(1)1-4和Kawakami等，(1994)PNAS USA 91：3515)。这些癌性细胞的I类HLA分子呈递含有AAGIGILTV(SEQ ID NO：43)(Melan-A_27-35)的来自该蛋白的肽。AAGIGILTV-HLA-A*0201复合物看来是黑色素瘤特异性T细胞的免疫显性靶标(Kawakami等，(1994)PNAS USA 91：3515)和(Rivoltini等，(1995)J.Immunol 154：2257)。因此，例如为向癌细胞递送细胞毒性或免疫刺激性药物，该肽-HLA复合物提供了TCR所能靶向的一种癌症标记。然而，对于该目的，如果与对肽-HLA复合物具有特异的天然TCR相比，该TCR对该复合物具有更高亲和力和/或更慢的解离速率则更理想。

发明简述

本发明首次利用了与AAGIGILTV-HLA-A*0201复合物相互作用具有小于或等于3μM的高亲和力(K_D)和/或对该复合物的解离速率(k_off)为1×10^-3S^-1或更慢的TCR。这种TCR可单用或与治疗性药物联用来靶向呈递该复合物的癌细胞。

发明详述

本发明提供具有结合AAGIGILTV-HLA-A*0201特性并含有至少一个TCRα链可变区和/或至少一个TCRβ链可变区的T细胞受体(TCR)，其特征在于，所述TCR对所述AAGIGILTV-HLA-A*0201复合物的K_D小于或等于3μM和/或对AAGIGILTV-HLA-A*0201复合物的解离速率(off-rate)(k_off)为1×10^-3 S^-1或更慢。

在本发明的另一实施方式中，所述TCR对AAGIGILTV-HLA-A*0201复合物的K_D小于或等于1μM。

可通过任何已知的方法测定K_D。优选方法是实施例4的表面等离振子共振(Biacore)方法。

为了比较，通过实施例4的Biacore方法测定天然MEL TCR(TCRα链见SEQID NO：9和TCRβ链见SEQ ID NO：10)的二硫键连接的可溶性变体与AAGIGILTV-HLA-A*0201复合物相互作用的K_D约为4μM。

AAGIGILTV-HLA-A*0201复合物的特异性天然MEL TCR具有以下Vα链和Vβ链基因应用(gene usage)(使用T cell receptor Factsbook(《T细胞受体手册》)，(2001)LeFranc和LeFranc，Academic Press，ISBN 0-12-441352-8中的术语，参见下文)：

α链-TRAV 12-2

β链：-TRBV 30。

天然MEL TCR可用作模板在其中引入各种突变从而使得本发明TCR和AAGIGILTV-HLA-A*0201复合物之间相互作用的亲和力高和/或解离速率慢。因此，与天然MEL TCR α链可变区(见附图1a和SEQ ID No：1)和/或β链可变区(见附图1b和SEQ ID NO：2)相比，本发明包括的TCR在其至少一个互补决定区(CDR)和/或可变区框架区中发生突变。还考虑了本发明TCR可变区中的其它超变区，例如超变4(HV4)区，可发生突变从而能产生高亲和力的突变体。

天然TCR以异二聚体αβ或γδ形式存在。然而，由一条TCR α链或TCR β链构成的重组TCR已显示能与肽MHC分子结合。

在一个实施方案中，本发明TCR同时包含α链可变区和TCR β链可变区。