[发明专利]纯化抗Aβ抗体的方法

说明书

相关申请案

本申请要求2005年6月17日提交的序号为60/691821的美国临 时专利申请“纯化含Fc区蛋白的方法(METHODS OF PURIFYING Fc REGION CONTAINING PROTEINS)”的优先权。该申请的全部内容并 入本文。

发明背景

阿耳茨海默氏病(“AD”)是一种神经退行性疾病，其特征在于淀 粉样蛋白斑，神经原纤维缠结和神经元大量丢失的出现。老年斑的主 要组分β淀粉样蛋白(也称为Aβ肽)与阿耳茨海默氏病的发病机理有 关(Selkoe(1989)Cell 58：611-612；Hardy(1997)Trends Neurosci. 20：154-159)。已显示β淀粉样蛋白不但对培养的神经元有直接毒性 (Lorenzo and Yankner(1996)Ann.NY Acad.Sci.777：89-95)，而且还 通过各种介质而具有间接毒性(Koh et al.(1990)Brain Research 533：315-320；Mattson et al.(1992)J.Neurosciences 12：376-389)。另外， 体内模型，包括PDAPP小鼠和大鼠模型表明，β淀粉样蛋白与学习能 力缺失，认知功能改变及海马长时程增强的抑制有关(Chen et al.(2000) Nature 408：975-985；Walsh et al.(2002)Nature 416：535-539)。因此，有 很多兴趣都集中在改变β淀粉样蛋白的水平，可能降低严重度甚至消 灭该疾病本身的疗法上。

近来因在PDAPP小鼠和大鼠实验模型中的成功研究而出现的一 种AD治疗策略在是个体被动免疫，以提供免疫球蛋白，如β淀粉样蛋 白的特异性抗体的策略(参见，例如，Bard et al.(2000)Nat.Med. 6：916-919和Bard et al.(2003)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 100：2023-2028)。最近还显示，被动免疫引起的Abeta保护抵抗拮抗 阿耳茨海默氏病转基因小鼠模型突触退变的进行性丢失。(Buttini et al. (2005)J.Neurosci.25：9096-101)。

重组技术的最新进展使得事实上针对任何靶点，例如，癌细胞， 细菌和病毒的抗体的产生成为可能。通常地，抗体用已被改造成表达 高水平的所述抗体的细胞系产生。随后，改造细胞系在包括糖，氨基 酸和生长因子及各种蛋白，包括例如，血清蛋白的复杂混合物的培养 物中生长。然而，从细胞副产物和培养物组分中分离完全抗体至足以 用于研究或用作治疗剂的纯度形成了严峻的挑战。如果准备将抗体用 作药物向人类给药，则抗体分子的纯化尤为关键。

传统抗体纯化方案(或系列)通常包括色谱步骤，所述色谱步骤 利用了与多种杂质的结合或截留相比，抗体分子优先结合或被色谱柱 的固相(或官能化固相)截留的能力。已建议或执行的纯化抗体的方 案为：首先将含有CH2/CH3区的蛋白结合在固相上所固定的A蛋白上， 然后通过用疏水电解质溶剂洗涤所述固相，除去固相上所结合的杂质， 接着从所述固相上回收所述含有CH2/CH3区的蛋白。然而，这些方案 的限制在于用来优先结合含有CH2/CH3区的蛋白的条件同样支持杂质 (例如，具有不完全CH2/CH3区的抗体)的结合。在人用治疗剂的开 发过程中，这些杂质是非常不希望有的。

因此，存在着改进对具有恒定区的蛋白或多肽，尤其是在细胞培 养中产生的含Fc区蛋白(例如，抗体)的纯化方法的需求。

发明概述

本发明的特征在于纯化Aβ结合蛋白，尤其Aβ结合抗体的方法。 本发明的方法特别适合为向人类给药而开发的蛋白(例如，抗体)的 纯化。尤其是，本发明的特征在于具有恒定区蛋白，尤其是在细胞培 养中产生的具有Fc区蛋白(例如，抗体)的纯化。