[发明专利]连接效应分子与蛋白质的方法

权利要求书

1.连接一个或多个效应分子与蛋白质中一个或多个半胱氨酸的方法，包括：

a)通过对不能形成分子内二硫键的单巯基还原剂或多巯基还原剂渗滤蛋白质活化蛋白质中的一个或多个半胱氨酸；和

b)使处理的蛋白质与效应分子反应。

2.权利要求1所述的方法，其中不能形成分子内二硫键的单巯基还原剂或多巯基还原剂在步骤(a)前存在于蛋白质样品中。

3.权利要求2所述的方法，其中蛋白质样品中还原剂的浓度为渗滤缓冲液中还原剂浓度的0.5-1.5倍。

4.权利要求3所述的方法，其中蛋白质样品中还原剂的起始浓度与渗滤缓冲液中的还原剂浓度相同。

5.权利要求1-5中任意一项所述的方法，其中还原剂的浓度为1mM。

6.权利要求1-5中任意一项所述的方法，其中在步骤(a)-步骤(b)之间从蛋白质样品中除去还原剂。

7.权利要求6所述的方法，其中通过凝胶过滤除去还原剂。

8.权利要求6所述的方法，其中通过渗滤除去还原剂。

9.权利要求1-8中任意一项所述的方法，其中所述还原剂选自β-巯基乙胺、β-巯基乙醇、谷胱甘肽或半胱氨酸。

10.权利要求1-9中任意一项所述的方法，进一步包括步骤(c)，其中纯化带有所需数量的效应分子的蛋白质。

11.权利要求1-10中任意一项所述的方法，其中所述蛋白质为抗体或其片段。

12.权利要求11所述的方法，其中所述蛋白质为抗体Fab′片段。

13.权利要求11或权利要求12所述的方法，其中效应分子所连接的至少一个半胱氨酸存在于抗体铰链区中。

14.权利要求11-13中任意一项所述的方法，其中效应分子所连接的半胱氨酸各自存在于抗体铰链区中。

15.权利要求1-14中任意一项所述的方法，其中所述效应分子为PEG。

16.权利要求15所述的方法，其中所述效应分子为40,000PEG-马来酰亚胺。