[发明专利]用于RNA干扰的寡核苷酸及其生物学应用

权利要求书

1.包含具有序列和/或长度相同或不同的双链寡核苷酸的组合物，所述寡核苷酸具有序列³′N₁N₂...N_i-1N_i...N_j⁵′，其中

-³′N_i...N_j⁵′是19-28聚体的双链寡核苷酸的序列的一半，其互补于存在于活细胞中的靶核酸序列，和

-³′N₁...N_i-1⁵′是3-50聚体的突出端的序列，其允许上述双链寡核苷酸的寡聚化。

2.权利要求1的寡核苷酸组合物，其中序列³′N_i...N_j⁵′包含19-21个核苷酸。

3.权利要求1或2的寡核苷酸组合物，其包含具有5-8个核苷酸的序列³′N₁...N_i-1⁵′。

4.权利要求1至3中任一项的寡核苷酸组合物，其中序列³′N₁...N_i-1⁵′包含稳定化基团。

5.权利要求4的寡核苷酸组合物，其中所述稳定化基团选自：被修饰的类似物例如脱氧核糖核苷酸取代的嘌呤核苷酸、嘧啶核苷酸，和/或修饰的核苷酸类似物例如糖或骨架经修饰的核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸。

6.权利要求1至5中任一项的寡核苷酸组合物，其包含至少一种在一个或两个5’末端带有5’磷酸或羟基的寡核苷酸。

7.权利要求1-6中任一项的寡核苷酸组合物，其中序列³′N_i...N_j⁵′选自：脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸或核苷酸类似物。

8.转染组合物，其包含至少一种权利要求1-7中任一项的寡核苷酸组合物，和转染试剂或制剂。

9.权利要求8的转染组合物，其中转染试剂是非病毒载体。

10.权利要求9的转染组合物，其中所述转染试剂选自阳离子脂质或阳离子聚合物。

11.用于制备权利要求1-7中任一项的寡核苷酸组合物的方法，其包括：

-通过化学或酶催化途径合成具有在权利要求1至7中任一项中定义的序列³′N_i...N_j⁵′和³′N₁...N_i-1⁵′的寡核苷酸链；

-退火由此获得的合成的寡核苷酸。

12.权利要求11的方法，进一步包括在权利要求1-7中任一项所述的寡核苷酸的退火步骤之后加入连接子，所述连接子具有互补于序列³′N₁...N_i-1⁵′的核苷酸序列末端。

13.权利要求12的方法，其中连接子选自：寡核苷酸、发夹样结构、具有3’或5’突出端的短双链核酸、双链寡核苷酸。

14.权利要求13的方法，其中连接子选自：脱氧核糖核苷酸，核糖核苷酸或核苷酸类似物。

15.在体外和体内抑制基因表达的方法，其包括使用权利要求1至7中任一项的寡核苷酸组合物，或使用权利要求8至10中任一项的转染组合物。

16.权利要求15的方法，其用于例如癌症或病毒感染治疗的治疗应用。