[发明专利]编码类异戊烯修饰酶的多核苷酸和其使用方法

权利要求书

1.一种编码修饰类异戊烯化合物的酶的分离多核苷酸，所述多核苷酸序列编码 氨基酸序列如SEQ ID NO：2所列的多肽，所述多肽表现出紫穗槐-4,11-二烯氧化酶 活性。

2.如权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸由SEQ ID NO： 1所列核苷酸序列构成。

3.一种重组载体，其包含权利要求1所述的多核苷酸。

4.一种宿主细胞，其包含权利要求1所述的多核苷酸。

5.一种宿主细胞，其包含权利要求3所述的重组载体。

6.一种在宿主细胞中生产类异戊烯化合物的方法，所述方法包括：

用合适培养基培养遗传修饰的宿主细胞，其中用编码紫穗槐二烯氧化酶的核酸 遗传修饰所述宿主细胞以生产紫穗槐二烯氧化酶，所述核酸编码氨基酸序列如SEQ ID NO：2所列的多肽，

其中，在紫穗槐-4,11-二烯底物存在下，所述紫穗槐二烯氧化酶的产生导致所述 紫穗槐-4,11-二烯底物发生酶修饰和产生类异戊烯化合物，所述类异戊烯化合物是青 蒿醇、青蒿醛和青蒿酸中的一种或多种。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述宿主细胞是真核宿主细胞。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述宿主细胞是酵母细胞。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述酵母细胞是酿酒酵母。

10.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述宿主细胞是植物细胞。

11.如权利要求6所述的方法，其特征在于，还用编码紫穗槐二烯合酶的核酸 遗传修饰所述宿主细胞，其中所述培养能产生所述紫穗槐二烯合酶，其中所述紫穗 槐二烯合酶修饰了焦磷酸法呢酯，以产生所述紫穗槐二烯氧化酶的底物紫穗槐-4,11- 二烯。

12.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述宿主细胞是通常不通过甲羟 戊酸途径合成焦磷酸异戊-1-烯酯(IPP)的宿主细胞，其中用编码甲羟戊酸途径中两种 或多种酶、IPP异构酶、焦磷酸法呢酯合酶和紫穗槐二烯合酶的一种或多种核酸遗传 修饰所述宿主细胞，所述培养能产生所述甲羟戊酸途径酶，其中所述两种或多种甲 羟戊酸途径酶、所述IPP异构酶、所述焦磷酸法呢酯合酶、所述紫穗槐二烯合酶和 所述紫穗槐二烯氧化酶的产生导致类异戊烯化合物的产生。

13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述两种或多种甲羟戊酸途径酶 包括甲羟戊酸激酶、磷酸甲羟戊酸激酶和甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶，其中在甲羟戊酸 存在下培养所述宿主细胞。

14.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述两种或多种甲羟戊酸途径酶 包括乙酰乙酰-CoA硫解酶、羟甲基戊二酰基-CoA合酶、羟甲基戊二酰基-CoA还原 酶、甲羟戊酸激酶、磷酸甲羟戊酸激酶和甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶。

15.如权利要求6所述的方法，其特征在于，用编码细胞色素P450还原酶CPR 的核酸遗传修饰所述宿主细胞，所述CPR的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。

16.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述编码CPR的核酸由SEQ ID NO:3 所列核苷酸序列构成。

17.如权利要求6所述的方法，其特征在于，编码所述紫穗槐二烯氧化酶的核 苷酸序列操作性连接于诱导型启动子。

18.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述宿主细胞是原核宿主细胞。

19.如权利要求18所述的方法，其特征在于，所述原核宿主细胞是大肠杆菌。

20.如权利要求18所述的方法，其特征在于，所述原核宿主细胞是通常通过 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸(DXP)途径合成IPP的原核宿主细胞。

21.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述DXP途径失活。