[发明专利]利用荧光显微镜的竞争性粒子免疫测定法

权利要求书

1.一种检测样品中被分析物存在情况的方法，其包括：

使样品、多种结合有竞争剂分子的微粒、和特异性结合被分析物的荧光标记的结合蛋白混合在一起；

让所述混合物在容器中放置一段足以让所述微粒沉降的时间；和

经由荧光显微镜方法，通过检测一个或多个视野中荧光标记的沉降微粒数量并将所述荧光标记的微粒数量与预定值比较，来测定所述样品中所述被分析物的存在情况，其中数量低于预定值则说明所述样品中存在高于阀值水平的所述被分析物。

2.权利要求1的方法，其中所述容器包括显微镜玻片。

3.权利要求1的方法，其中所述容器包括孔，其中所述孔的底部为光学透明的，其中所述微粒沉降到所述孔底。

4.权利要求1的方法，其进一步包括在将所述混合物置于容器之前将所述混合物储存一段时间。

5.权利要求4的方法，其中储存包括使所述混合物储存约1分钟-约45分钟(1min.-45min.)。

6.权利要求4的方法，其中储存包括使所述混合物储存超过约60分钟(60min.)。

7.权利要求1的方法，其中所述样品为生物样品。

8.权利要求7的方法，其中所述生物样品来自禽蛋。

9.权利要求7的方法，其进一步包括在所述混合步骤之前获得所述生物样品。

10.权利要求7的方法，其中所述生物样品包括选自尿囊液、卵黄、尿、粪、血液、血浆、血清、羊水、胚下液、淋巴、脑脊髓液、乳汁、组织、组织匀浆和其组合的材料。

11.权利要求1的方法，其中所述微粒包括直径小于约6微米(6μ)的大体球形的珠粒。

12.权利要求1的方法，其中所述微粒包括直径为约3-15微米(3μ-15μ)的的大体球形的珠粒。

13.权利要求1的方法，其中所述微粒包括选自聚苯乙烯、蜜胺、尼龙、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、二氧化硅、金和氧化铁的材料。

14.权利要求1的方法，其中所述结合蛋白为抗体。

15.权利要求14的方法，其中所述抗体为单克隆抗体。

16.权利要求14的方法，其中所述抗体为多克隆抗体。

17.权利要求1的方法，其中所述结合蛋白为受体。

18.权利要求1的方法，其中所述荧光标记的结合蛋白用选自藻胆蛋白、罗丹明染料或其衍生物、荧光素染料或其衍生物、AlexaFluor染料、BODIPY染料、花青染料或其衍生物和德克萨斯红的荧光染料标记。

19.权利要求1的方法，其中所述被分析物选自蛋白质、肽、肽类生长因子、细胞因子、类固醇激素、蛋白质激素、抗体、病原体、环境污染物、爆炸物和违法物质。

20.权利要求1的方法，其中所述被分析物为选自雌二醇、雌酮、雌二醇缀合衍生物、雌酮缀合衍生物和其组合的雌激素类固醇化合物。

21.权利要求1的方法，其中所述混合步骤包括首先使所述样品和结合蛋白混合在一起，随后将所述微粒加入到所述样品-结合蛋白混合物中。

22.权利要求1的方法，其中所述经由荧光显微镜方法测定所述样品中所述被分析物存在情况的步骤，包括经由荧光显微镜成像而得到所述混合物的一个或多个图象。

23.权利要求3的方法，其中经由荧光显微镜方法测定所述样品中所述被分析物存在情况包括：

测定所述孔底的中值高度；和

于高度分别高于和低于所述中值高度的焦平面获得所述孔中混合物的至少两个图像。

24.权利要求3的方法，其中经由荧光显微镜方法测定所述样品中所述被分析物存在情况包括：

测定所述孔底的中值高度；

于高度分别高于和低于所述中值高度的焦平面获得所述孔中混合物的至少两个图像；和

获得所述孔中混合物的孔底焦平面图像。