[发明专利]利用荧光显微镜的竞争性粒子免疫测定法

说明书

相关申请资料

本申请要求于2005年5月11日提交的美国专利临时申请第60/679,717号的权益，该申请内容以其整体在此引作参考。

发明领域

本发明一般涉及测量样品中的被分析物的方法，更具体地讲，涉及用竞争性粒子免疫测定测量被分析物的方法。

发明背景

基于某些可观测的品质进行禽蛋判别，这在家禽业是众所周知和长期使用的实行方法。“照蛋”是一种这类技术的常用名词，是来源于用蜡烛光检查蛋这一习惯的术语。正如熟悉蛋的人所知，尽管蛋壳在最好的照明条件下似乎不透明，但实际上其有些半透明，当将其置于直射光前时，可看到蛋的内容物。

在孵化室管理中，可能理想的是基于诸如性别、疾病、遗传性状等等不同特性来分开禽类。举例而言，可能理想的是用特定疫苗接种雄性禽类，而用不同疫苗接种雌性禽类。在孵化时由于其它原因分开禽类性别也可能很重要。例如，因为雄性火鸡和雌性火鸡的生长率和营养需求不同，习惯上按性别来分离火鸡。在产蛋鸡或食用蛋工业，理想的是只保留雌性。在肉用仔鸡工业，理想的是基于性别将鸡分开以增进饲养效率、改进加工的一致性和降低生产成本。

不幸的是，鸟类性别鉴定的常规方法可能花费大、劳动强度大、费时长，通常需要训练有素的专门技术人员。鸟类性别鉴定的常规方法包括羽毛鉴定性别法、肛门鉴定性别法和DNA或血液鉴定性别法。每小时约可经羽毛鉴定三千只(3,000)鸡的性别，每只鸡花费约0.7-2.5美分。每小时约可经肛门鉴定一千五百只(1,500)鸡的性别，每只鸡花费约3.6-4.8美分。通过分析采自禽的小量血液样品，可实施DNA或血液鉴定性别法。

理想的是在孵化前鉴别禽类性别以及禽类的其它特性。孵化前性别鉴定可显著降低家禽业各个环节的成本。尽管常规照蛋技术能比较有效地区分活蛋和死蛋，但这些常规照蛋技术不能可靠地测定未孵化的禽类的性别和其它特性。

发明概述

本发明一方面提供检测样品中被分析物存在情况的方法，其包括：

使样品、结合有竞争剂分子的多种微粒、和特异性结合被分析物的荧光标记的结合蛋白混合在一起；

让该混合物在容器中放置一段足以让微粒沉降的时间；和

经由荧光显微镜方法，通过检测一个或多个视野中荧光标记的沉降微粒的数量并将荧光标记的微粒数量与预定值比较，来测定样品中被分析物的存在情况，其中数量低于预定值说明样品中存在高于阀值水平的被分析物。

本发明也提供测定蛋中禽胚胎性别的方法，其包括：

使来自禽蛋的尿囊液样品与结合有竞争剂分子的多种微粒和特异性结合雌激素类固醇化合物的荧光标记的结合蛋白混合在一起；

让该混合物在容器中放置一段足以让微粒沉降的时间；和

经由荧光显微镜方法，通过检测荧光标记的沉降微粒，来测定样品中雌激素类固醇化合物的存在情况，其中样品中存在高于阀值量的雌激素类固醇化合物说明禽胚胎为雌性。

本发明另一方面提供检测样品中被分析物存在情况的方法，其包括：

使液态样品、结合有竞争剂分子的多种能漂浮的微粒、和特异性结合被分析物的荧光标记的结合蛋白混合在一起；

让该液态混合物在容器中放置一段足以让能漂浮的微粒漂浮到靠近液态混合物表面的时间；和

经由荧光显微镜方法，通过检测荧光标记的微粒数量并将荧光标记的微粒数量与预定值比较，来测定样品中被分析物存在情况，其中数量低于预定值说明液态样品中存在高于阀值量的被分析物。

在以下的本发明说明中更详细阐明本发明的这些和其它方面。

附图简述

图1为阐明按本发明实施方案测定样品中被分析物存在情况的方法的流程图。

图2为可用于实施本发明实施方案的例示性样品盘的俯视图。

图3为阐明孔底部高度的可变性的例示性样品盘的侧视图。

图4为阐明按本发明实施方案测定禽蛋尿囊液样品中雌激素类固醇化合物存在情况的方法的流程图。

图5为阐明按本发明实施方案用能漂浮微粒测定液态样品中被分析物存在情况的方法的流程图。

发明详述

现在将在下文中参考附图更全面地阐述本发明，其中展示优选的本发明实施方案。然而，本发明可以不同形式来具体化，不应该解释为局限于本文提出的实施方案；相反，提供这些实施方案是为了向本领域技术人员完全彻底和全面地传达本发明范围。全文中相同的编号指相同的要素。在各图中，为了清楚起见可能夸大了某些线条、层次、成分、要素或特征的厚度。除非另外所指，否则虚线说明任选的特征或操作。