[发明专利]用于乳腺癌的诊断/预后的方法

说明书

本发明涉及用于乳腺癌的诊断/预后的方法。本发明还涉及可在本方法中使用的扩增引物和杂交探针，以及涉及用于乳腺癌的诊断/预后的试剂盒。

乳腺癌是一种常见的疾病：每11个妇女就有1个在其一生中发展出乳腺癌。然而，由于存在各种不同类型的乳腺癌和各种不同的对乳腺癌的预后，患有乳腺癌的妇女不会全部都接受相同的治疗：医生给每位患者建议一种适合其情况的治疗，以便获得最佳的恢复机会。

因而，将作为乳腺癌中的一般疗法的激素疗法用于激素依赖性乳腺癌，即在其细胞表面上表达激素受体的肿瘤的情形。在手术后，激素疗法可单独使用或接续在辅助性化疗之后进行使用。在疾病复发的情况下，激素疗法可单独地开处方，或者与化疗相联合或接续地开处方。

化疗其本身是一种通用的癌症疗法，因为由血液循环携带的药物可以在生物体的各处发挥作用。化疗在治疗手段中占有重要位置，特别是在过去的十年左右，伴随着新分子的出现。所述药物最通常通过静脉输注、通过皮下途径或通过肌内途径来进行施用。

因而，取决于激素受体在激素细胞表面的表达，治疗将朝向或不朝向激素疗法。

应该特别提到雌激素受体ER和孕酮受体(PR)，这两种受体是最熟知的用于预测乳腺癌中对激素疗法的响应的参数。UPA(尿激酶型纤溶酶原激活物)和PAI-1(纤溶酶原激活物抑制剂类型-1)基因的表达分析也使得可能从乳腺癌的预后工具中获益。这些基因牵涉细胞外基质的破坏，并因而是牵涉肿瘤转移形成的因子(Andreasen等人，Int.J.Cancer，1997)。

为了给患者提供合适的治疗，因而有必要了解激素受体例如ER和PR的表达。这种表达最通常在原发性肿瘤上通过免疫组织化学来研究。此外，了解HER2受体的表达是重要的，通过免疫组织化学研究的HER2受体的过表达是预后不良的一个因素。在存在疑虑情况下，通过原位杂交(FISH)来研究HER2基因的基因扩增是所使用的备选方法。最后，作为肿瘤的侵袭性因子的UPA和PAI-1的表达分析通过ELISA(酶联免疫吸附测定法)来进行研究。

近些年来，已经能够检测小尺寸的肿瘤，从而使得能较早诊断乳腺癌，但是由于少量的肿瘤组织使得难以进行对上面提到的激素受体和因子的蛋白质定量，所以对于这种癌的预后仍然很难。

本发明提出了一种用于乳腺癌的诊断/预后的新方法。该方法特别地利用对UPA和PAI-1基因的表达分析，该分析通过使用可用作扩增引物或杂交探针的新的核苷酸序列来进行。根据本发明的方法尤其使得能够确定患有乳腺癌的患者的预后，以便给所述患者提供合适的疗法。

在这方面，本发明涉及用于乳腺癌的诊断/预后的方法，所述方法包括以下步骤：

A-从生物样品中提取核物质(matériel nucléique)；

B-使用至少一对扩增引物来获得所述核物质的至少一种靶序列的扩增子；

C-使用至少一种检测探针来检测所述扩增子的存在，

所述方法的特征在于，在步骤B中，所述引物对包括至少一种含有选自SEQ ID No.1至SEQ ID No.8的核苷酸序列的至少10个核苷酸单元的扩增引物，和/或在步骤C中，所述检测探针含有选自SEQ IDNo.9至SEQ ID No.10的核苷酸序列的至少10个核苷酸单元。

令人惊奇地，本发明人因而已经发现，在用于乳腺癌的诊断/预后的方法中，将含有选自SEQ ID No.1至SEQ ID No.8的核苷酸序列的至少10个核苷酸单元的核苷酸序列用作用于扩增靶序列(例如编码UPA和PAI-1的基因)的扩增引物是十分恰当的。本发明还已经发现，对于在靶序列例如编码UPA和PAI-1的基因上的特异性杂交而言，将含有选自SEQ ID No.9至SEQ ID No.10的核苷酸序列的至少10个核苷酸单元的核苷酸序列用作杂交探针是十分适合的。

为了本发明目的，术语“生物样品”表示可能含有如下文定义的核物质的任何样品。这种生物样品可以取自患者，并且特别可以是来自患者的组织、血液、血清、唾液、循环细胞样品。优选地，这种生物样品取自肿瘤。这种生物样品通过本发明技术人员已知的任何采样手段获得。

为了本发明的目的，术语“核物质”包括核酸序列，例如脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)序列。根据本发明的一个优选实施方案，核物质包括脱氧核糖核酸序列。根据本发明的一个优选实施方案，核物质从取自患者的生物样品中提取。