[发明专利]不含腺病毒的重组腺病毒载体的快速生产

说明书

与相关申请的交叉参照

本申请要求于2005年5月23日提交的美国临时申请系列号 60/683,638的优先权。

还提及的是于2002年1月18日提交的美国专利申请系列号 10/052,323；于2002年4月5日提交的10/116,963；于2003年1月16 日提交的10/346,021和美国专利号6,706,693；6,716,823；6,348,450， 以及于1998年8月13日提交的PCT/US/98/16739。

本文中引用的这些申请、专利中的每一个和每个文件，以及这些 申请、专利和文件中的每一个中引用的每个文件(“申请引用的文件”)， 以及在申请及其专利的文本中或其依法进行过程中申请引用的文件中 参考或引用的每个文件，以及在其依法进行过程中提出的支持专利性 的所有争辨，在此引入本文作为参考。

发明领域

总的来说，本发明涉及免疫学、基因治疗和疫苗技术领域。更具 体而言，本发明涉及可以快速产生不含可复制腺病毒(RCA)的高效 价腺病毒载体的新型系统。还提供了产生这些不含RCA的腺病毒载体 的方法，包含这些不含RCA的腺病毒载体的免疫原性或疫苗组合物， 在这些腺病毒载体中表达目的异源核酸的方法，和使用这些腺病毒载 体引起免疫原性应答的方法。

发明背景

流感病毒是重新席卷以及浮现的针对公共卫生的微生物威胁。由 该病毒造成的呼吸道感染通常伴随咳嗽、发热和肌痛。致死性流感毒 株的出现(Subbarao等人，1998)和产生设计的流感病毒的允许技术 的开发(Hoffmann等人，2002；Neumann等人，1999)已发出如下警 告信号，通过恶意人士意图作为致死性武器或失能剂散播的毒性流感 毒株或编码外毒素的人造病毒可以使某一区域瘫痪。目前可用的、得 到临床许可的流感疫苗由三价灭活病毒组成，所述三价灭活病毒自20 世纪40年代早期已肌内施用(Pfleiderer等人，2001)。使用这些疫苗 每年秋季的接种疫苗在保护人们免于遭受这种接触性传染病方面是有 效的(Nichol等人，1995)。然而，需要含胚鸡蛋以产生疫苗限制了 疫苗生产的速度。可以想象当超过计算的新流感病毒株出现时，鸡场 被禽流感破坏，和/或生产设备变得被污染，如2004年的情况，将出现 流感疫苗缺乏。

近来，已开发了活减毒流感病毒疫苗(FluMist^TM)作为用于流感 接种疫苗的无针可替代物(Hilleman，2002)。活减毒疫苗通过鼻内喷 雾剂直接向呼吸道施用，以预防健康儿童、青少年和成年人(年龄5 -49岁)中的流感。如同灭活流感病毒疫苗，活减毒流感病毒疫苗也 在含胚鸡蛋中生产。尽管蛋中鸡病原体的存在对于甲醛杀死的病毒疫 苗不是问题，但这对于活减毒流感病毒疫苗是生物危害。通过活减毒 和野生流感病毒之间重组产生的可能有害的重配提出了另一个生物危 害忧虑。活减毒流感疫苗的鼻内接种也与轻度不利事件相关，例如鼻 漏、咽喉痛或低热。此外，活减毒病毒在复制期间可能破坏上呼吸道 中的上皮细胞，从而为具有肺并发症的继发感染铺路(Hilleman，2002； Marwick，2000)。

在含胚鸡蛋中生产活减毒和灭活流感病毒疫苗的需要对流感疫苗 的流水线制备造成主要障碍，因为该过程是耗时的且某些流感病毒株 在蛋中不会繁殖至高效价(Van Kampen等人，2005)。人可以通过鼻 内和局部应用腺病毒(Ad)运载的流感疫苗有效且安全地被免疫的证 明(Van Kampen等人，2005)代表了用于以不依赖含胚鸡蛋的及时方 式制备流感疫苗的新方法。