[发明专利]针对通用肿瘤抗原的多克隆抗血清

说明书

本发明涉及针对通用肿瘤抗原的多克隆抗血清，其可通过下述步骤获 得：(i)在非人脊椎动物中激发针对胚胎组织的体内体液应答，其中所述胚 胎组织与所述非人脊椎动物是相同的遗传系；(ii)从经免疫的非人动物回收 脾，并从所述脾中分离单个脾细胞/淋巴细胞；(iii)在与步骤(i)的非人动物 遗传系相同的其他非人动物中，激发针对步骤(ii)中获得的经分离脾细胞/ 淋巴细胞悬液的第二体内体液应答；和(iv)从所述动物分离目的多克隆抗血 清。另外，本发明提供多克隆抗血清制备药物组合物的用途，所述药物组 合物用于改善、预防和/或治疗癌症，特别是乳腺癌、肺癌、前列腺癌、子 宫癌、结肠癌、胃癌或膀胱癌。另外，本发明涉及本发明的多克隆血清制 备药物组合物的用途，其中所述药物组合物要被施用于受试者，所述受试 者需要与其他抗增殖药物或药剂组合治疗。

2003年在美国诊断出约一百万个新的癌症病例，约50万人会死于该 疾病。癌症因此是美国和全世界第二主要的死亡原因(American Cancer Society，2003；Stern，2004)。癌症治疗的常规方法(如化学疗法、外科手术 或放射疗法)大部分效力有限，因为它们通常是非特异和不准确的(Kimball， 1993)。然而在许多情况下，肿瘤特异地表达基因，所述基因的产物是诱导 或维持恶性状态所需要的。这些蛋白质可作为抗原标记物用于开发和建立 有效的抗癌治疗。已知抗原引发免疫应答。这些抗原是蛋白质、多糖、脂 质或糖脂，它们被淋巴细胞(即B细胞和T细胞)识别为“外源的”。暴 露于如上所述的抗原引发淋巴细胞快速的细胞分裂和分化应答，导致形成 被暴露的淋巴细胞的克隆。B细胞产生浆细胞，所述浆细胞随后产生与抗 原选择性结合的抗体。但是，单克隆抗体是B淋巴细胞单个克隆的产物， 多克隆抗体通过B淋巴细胞的若干个克隆产生。

通过用鼠内皮细胞接种兔，已成功地在小鼠中将多克隆抗体用于诱导 细胞凋亡并封闭肿瘤生长的支持。该途径产生具有潜在抗血管生成活性的 多克隆免疫球蛋白。多克隆抗体在小鼠肿瘤模型中显示抗肿瘤活性，并证 明在体内肿瘤放射成像中有用(Scappaticci，2003)。Okaji等(2004)也报导 了自身免疫对结肠癌的血管发生和转移的抑制效应。在该研究中用 Colon-26癌症的肝窦状内皮细胞免疫细胞BALB/c小鼠，所述细胞诱导既 有预防性又有治疗性的抗肿瘤免疫，所述免疫显著抑制转移的发生。免疫 球蛋白应答涉及IgM和IgG亚类的抗体。另外，专利申请WO 01/89563 设想并描述了纯化的多克隆抗体用于治疗变态反应的用途。具体的，其公 开了在变应原(其通常为复合蛋白质)的情况下，用多克隆抗体治疗是明 显有利的并优于使用单克隆抗体。

根据Abelev，可区分四组抗原：(i)病毒肿瘤抗原，其对于该类型的任 何病毒肿瘤是相等的，(ii)致癌肿瘤抗原，其对患者和肿瘤是特异的，(iii) 移植型同种抗原或肿瘤特异的移植抗原，其在所有各肿瘤类型中是不同的， 但是在相同病毒引起的不同肿瘤中是相同的；和(iv)胚胎抗原。在致癌作用 中，细胞是去分化的，并从而可具有胚胎状态的基因表达。因此，对生物 胚胎发育特异的胚胎抗原可以在这些癌性细胞中发现。这类抗原可以免疫 生物免受肿瘤侵犯，并可用于建立抗癌治疗。最突出的胚胎抗原是α-胎蛋 白(α-fetoprotein)和致癌胚胎抗原(CEA)。α-胎蛋白是胎儿中主要的转运蛋 白，并特别在临床实验室中用作癌症和胎儿缺陷的血清标记(Tatarinov， 1965；Abelev，1971；Mizejewski，2003)，并用作针对头颈癌的特异免疫治疗 的靶标(Kass，2002)。CEA是糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族并与细胞间 黏附分子1(ICAM-1)具有相似性。CEA首先被鉴定为存在于胎儿结肠和结 肠腺癌中但是不存在于健康成人结肠中的一种抗原。CEA是用于胰腺癌、 胃癌和乳腺癌的最广泛使用的标记之一，以及结肠直肠癌中最常用的标记。 CEA也用作例如特异抗体组合物的治疗靶标。

尽管上文表征的胚胎抗原已经在癌症检测和监测中成为关键性的，但 是仍然显著缺乏涉及肿瘤细胞中胚胎抗原存在的信息和理解。WO 99/53952提供了用于生产抗通用肿瘤抗原的特异抗血清的方法，所述抗原 差异衍生自胚胎组织。提议相应的抗血清作为用于检测(恶性)肿瘤的诊 断工具。