[发明专利]被咖啡中的苦味分子(绿原酸内酯)激活的人T2R受体的鉴定和用于鉴定人苦味调节剂的相关测定法

权利要求书

1.用于鉴定化合物的测定法，所述化合物调节对绿原酸内酯发生 特异性响应的人T2R苦味受体，所述hT2R选自hT2R8、hT2R14和hT2R54， 该方法包括：

i.就其对绿原酸内酯化合物诱导hT2R8、hT2R14、hT2R54或其片 段、变体、直系同源物、突变体或嵌合物的激活的影响筛选化合物，所 述片段、变体、直系同源物、突变体或嵌合物被绿原酸内酯或结构相关 性化合物激活，和

ii.基于其对所述绿原酸内酯或结构相关性化合物对所述受体的 激活的影响确定所述化合物是否调节hT2R8、hT2R14和/或hT2R54相关 性苦味。

2.权利要求1的测定法，其中所述hT2R8选自

i.SEQ ID NO：3中包含的氨基酸序列，

ii.由在严紧杂交条件下与SEQ ID NO：2中包含的序列杂交的核 酸序列编码，或

iii.具有与SEQ ID NO：3中包含的多肽具有至少90％的序列同一 性的氨基酸序列。

3.权利要求1的测定法，其中所述hT2R14选自

i.SEQ ID NO：5中包含的氨基酸序列，

ii.由在严紧杂交条件下与SEQ ID NO：6中包含的序列杂交的核 酸序列编码，或

iii.具有与SEQ ID NO：5中包含的多肽具有至少90％的序列同一 性的氨基酸序列。

4.权利要求1的测定法，其中所述hT2R54选自

i.SEQ ID NO：7中包含的氨基酸序列，

ii.由在严紧杂交条件下与SEQ ID NO：6中包含的序列杂交的核 酸序列编码，或

iii.具有与SEQ ID NO：7中包含的多肽具有至少90％的序列同一 性的氨基酸序列。

5.权利要求1的测定法，其中所述味觉受体在细胞膜上表达。

6.权利要求1的测定法，其中所述味觉受体在分离的细胞膜上表 达。

7.权利要求1的测定法，其中所述味觉受体在完整的细胞上表达。

8.权利要求1的测定法，其中所述味觉受体在真核细胞上表达。

9.权利要求1的测定法，其中所述味觉受体由两栖类动物、哺乳 类动物或昆虫的细胞表达。

10.权利要求1的测定法，其中所述味觉受体在选自HEK293、BHK、 COS、HEK293T、CHO和爪蟾卵母细胞的细胞上表达。

11.权利要求1的测定法，其为荧光测定法。

12.权利要求1的测定法，其为结合测定法。

13.权利要求1的测定法，其通过测定它对细胞内离子浓度的影响 来检测所述化合物的影响。

14.权利要求1中测定法，其检测所述化合物对细胞内钠或钙的影 响。

15.权利要求1的测定法，其检测所述化合物对细胞膜电位的影 响。

16.权利要求1的测定法，其检测所述化合物对所述味觉受体的转 录的影响。

17.权利要求1的测定法，其中基于它阻断所述味觉受体与雷尼替 丁的相互作用的能力选择所述化合物。

18.权利要求1的测定法，其检测所述化合物对细胞内cAMP、cGMP 或IP3的影响。

19.权利要求1的测定法，其中所述味觉受体包含所述味觉受体的 细胞外结构域或跨膜区。

20.权利要求1的测定法，其中所述测定法使用钙特异性荧光染料 检测钙的变化。

21.权利要求1的测定法，其中所述测定法使用选自Fluo-3、 Fluo-4和Fura-2的染料检测细胞内钙的变化。