[发明专利]被咖啡中的苦味分子(绿原酸内酯)激活的人T2R受体的鉴定和用于鉴定人苦味调节剂的相关测定法

说明书

相关应用

本申请涉及2002年7月10日提交的涉及美国系列No. 10/191,058和2001年4月5日提交的美国系列No.09/825,882，所 述两个申请都在此以其全文引用作为参考。这些申请涉及hT2R的鉴定 和其在测定中用于鉴定激活特定T2R的配体的用途。此类配体用于调 节味觉，特别是苦味。

发明领域

本发明涉及苦味化合物的阐明，所述苦味化合物激活许多之前报 导的参与苦味感觉的T2R家族中的人G蛋白偶联受体(GPCR)。特别地， 本发明涉及发现：hT2R8、hT2R14和hT2R54对绿原酸内酯发生特异性 响应，所述绿原酸内酯是至少部分形成咖啡的苦味的原因。因此，可 使用受试者T2R鉴定化合物，所述化合物调节(优选阻断)苦味，例 如咖啡中发现的苦味化合物和相关的苦味促味剂的苦味。

更特别地，本发明显示受试人苦味受体、其片段或变体或嵌合物 (包括其直系同源物(ortholog)、剪接变体、单核苷酸多态性(SNPS) 和基因工程改造的突变体)在用于鉴定化合物的测定法优选基于高通 量细胞的测定法中是有用的，所述化合物调节(优选阻断)绿原酸内 酯分子以及结构相关性化合物和激活此类受体的其他化合物的苦味。 可将使用这些测定法鉴定的化合物在食物、饮料或药品中用作添加剂 以改善其味道。此外，本发明涉及为了减少或消除激活受试者T2R的 苦味化合物而进行处理和配制的改良的食品、饮料和药物。

相关领域描述

人可识别的一种基本味觉是苦味。直至最近对苦味的生理学仍然 知之甚少。近年来的研究已开始阐明味觉生物学(Lindemann，Nature (2001))。现在认为许多苦味化合物通过与细胞表面受体相互作用来产 生苦味。这些受体属于与细胞内G蛋白相互作用的7个跨膜结构域受 体的家族。已在人和啮齿类动物中鉴定了称为T2R的GPCR新家族 (Adler等人，Cell 100(6)：693-702(2000)；Chandrashekar等人， Cell 100(6)：703-711(2000)；Matsunami H，Montmayeur J P，Buck LB.Nature 404(6778)：601-4(2000))。几个证据线索显示T2R介 导对苦味化合物的反应。首先，T2R基因在舌和腭上皮的味觉感觉器 细胞的亚群中特异性表达。第二，人T2R中的一种(hT2R1)的基因位于 在人中与对苦味化合物6-正-丙基-2-硫脲嘧啶的敏感性相关的染色 体基因座中(Adler等人，(Id.)(2000))。第三，小鼠T2R中的一种 (mT2R5)的基因位于小鼠中与对苦味化合物环己酰亚胺的敏感性相关 的染色体基因座中。也显示mT2R5可激活味导素(gustducin)(在味 觉细胞中特异性表达的G蛋白)和与苦味刺激转导相关(Wong等人， Nature 381：796-800(1996))。mT2R5对味导素的激活只在对环己酰 亚胺的响应中发生(Chandrashekar等人，(Id.)(2000)。因此，有人 提出mT2R家族在小鼠中介导苦味反应，而hT2R家族在人中介导苦味 反应。已鉴定了几种作为某些苦味配体的受体的人 T2R(Chandrashekar等人，(Id.)2000；Bufe等人，(Id.)2002；Kim 等人Science 299，2003；Pronin等人，Chemical Senses 29，2004； Behrens等人，BBRC 319，2004；Kuhn等人，J.Neuroscience 24，2004； Bufe等人，Current Biology，15，2005)。也显示各hT2R能够结合 多种苦味配体。该假说基于这样的事实，即hT2R家族只由24个已鉴 定的成员组成，然而人可识别数百种不同的苦味化合物。之前已报导 了hT2R的序列，其公开于Zuker等人(WO 01/18050 A2，(2001))和 Adler等人(WO 01/77676 A1(2001))的公开的PCT申请中，其两者 在此以其全文引用作为参考。