[发明专利]疫苗生产方法

权利要求书

1.一种制备免疫原性组合物的方法，所述方法包括使用碳二亚胺缩合化学法将糖与蛋白载体缀合，其中所述糖包含或经衍生化后包含氨基和/或羧基，其中所述蛋白载体包含或经衍生化后包含氨基和/或羧基，所述方法包括以下步骤：

I)如果所述蛋白载体同时包含氨基和羧基，而所述糖包含氨基和羧基之中的任一个，则：

a)将糖和进行缀合所需的等份碳二亚胺混合，和

b)在35秒至6小时的时间段内加入所需的等份蛋白载体；

II)如果所述糖同时包含氨基和羧基，而所述蛋白载体包含氨基和羧基之中的任一个，则：

a)将蛋白载体和进行缀合所需的等份碳二亚胺混合，和

b)在35秒至6小时的时间段内加入所需的等份糖；

III)如果所述糖同时包含氨基和羧基，而且所述蛋白载体也同时包含氨基和羧基，则：

a)将蛋白载体和糖混合，和

b)在35秒至6小时的时间段内加入进行缀合所需的等份碳二亚胺。

2.权利要求1的方法，其中步骤b)中的所述时间段为50秒至5小时、1分钟至4小时、2分钟至3小时、3分钟至2小时、4-60分钟、5-50分钟、6-40分钟、7-30分钟或8-20分钟。

3.权利要求1的方法，其中步骤b)中的所述时间段为1分钟至5小时、10分钟至4小时、20分钟至3小时、30分钟至2小时、40-90分钟或50-70分钟。

4.权利要求1的方法，其中所述糖包含作为其重复单元的一部分的氨基和/或羧基。

5.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述碳二亚胺是EDAC(1- 乙基-3-(3-二甲基-氨基丙基)碳二亚胺)或非EDAC的碳二亚胺。

6.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述进行缀合所需的等份碳二亚胺为每mg糖0.01-3mg、0.05-2mg或0.09-1mg碳二亚胺。

7.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述糖和/或蛋白载体经衍生化后包含氨基或羧基。

8.权利要求7的方法，其中所述衍生化是通过加入异双官能连接物或同双官能连接物实现的。

9.权利要求8的方法，其中所述连接物具有4-12个碳原子。

10.权利要求8的方法，其中所述连接物具有两个活性氨基。

11.权利要求8的方法，其中所述连接物是ADH。

12.权利要求8的方法，其中所述连接物具有两个活性羧基。

13.权利要求8的方法，其中所述连接物在其一端具有活性氨基，而在其另一端具有活性羧基。

14.权利要求8-13中任一项的方法，其中所述衍生化通过使大量过量的连接物与要衍生化的糖和/或蛋白载体反应而发生。

15.权利要求8-13中任一项的方法，其中所述糖包含作为其重复单元的一部分的活性羟基，所述糖经连接物上的氨基被部分衍生化。

16.权利要求15的方法，其中所述糖用CDAP化学法部分衍生化。

17.权利要求8-13中任一项的方法，其中所述糖包含作为其重复单元的一部分的活性氨基，所述糖经连接物上的羧基被部分衍生化。

18.权利要求17的方法，其中所述糖用碳二亚胺缩合化学法部分衍生化。

19.权利要求8-13中任一项的方法，其中所述糖包含作为其重复单元的一部分的活性羧基，所述糖经连接物上的氨基被部分衍生化。

20.权利要求19的方法，其中所述糖用碳二亚胺化学法部分衍生化。

21.权利要求1的方法，其中步骤b)中的所述等份碳二亚胺、糖 或蛋白载体使用泵以恒定速率加入。

22.权利要求1的方法，其中步骤b)中的所述等份碳二亚胺、糖或蛋白载体在所述时间段内分阶段加入。

23.权利要求22的方法，其中在前半个时间段加入至少1/4等份试样，在后半个时间段加入至少1/4等份试样。