[发明专利]具有提高治疗活性的方法和成分

说明书

技术领域

本发明涉及与Fc受体相互作用的改性治疗蛋白质和生产改性治疗 蛋白质(例如抗体)的方法，致使寡糖链的成分可提高抗体对其靶标的亲 合力和改变受体结合亲和力并因此与未改性的抗体相比改变所述抗体 效应子功能活性。

背景技术

抗体为先天免疫中担任重要作用的可溶血清糖蛋白。所有天然产生 抗体的碳水化合物结构在重链恒定区保守位置随着同种型的不同而变 化。各种同型具有不同排列的N-连接寡糖结构，其可不同地影响蛋白质 组装、分泌或功能活性(Wright，A.，和Morrison，S.L.，Trends Biotech. 15：26-32(1997))。参照图1和2，连接N-连接寡糖的结构依赖处理的程度 可相当大地变化，且可包括高甘露糖以及复合双触角的寡糖，可有或没 有二等分的GlcNAc和核心岩藻糖残基(Wright，A.，和Morrison，S.L.， supra)。一般地，在特定糖基化位点连接核心寡糖结构具有异种的处理 方法，恰好使单克隆抗体存在多种糖形式。同样地，已经显示在产生抗 体的细胞系之间出现了抗体糖基化的主要差异，和甚至在不同培养条件 下生长的指定细胞系中观察到次要的差异。

已知聚糖上的唾液酸(静电基团(static groups))在延长除抗体之外的 糖蛋白的血清半衰期中是重要的(Stockert，R.J.(1995)Physiol.Rev.75， 591-609)。到目前为止，单克隆抗体(Mab)上唾液酸的作用不是很清楚的。 Mab的血清半衰期是尤其长的并证明了Fc融合蛋白的构建在开发治疗 蛋白质例如蛋白质enteracept中是有用的策略。

抗体和T细胞受体分子具有负责特异细胞表面受体结合的区域，所 述结合调节细胞应答。免疫系统中，将这些功能归类为体液的和细胞的。 抗体常常指作衔接分子，连接体液和细胞的免疫机制：体液应答主要归因 于能与靶抗原高亲和结合的成熟的、分泌的、循环抗体。细胞应答归因 于细胞活化的结果，所述细胞活化可通过ab-ag复合体的结合和通过作 为复合体结合效应细胞的结果的细胞介质释放所引起的下游区结局而 实现。这些细胞应答包括中和靶标、调理和敏化(如果抗原位于细胞表 面)、敏化肥大细胞、和活化补体。至于细胞靶标，即为，细胞表面抗原， 这些效应子功能导致通常所称的抗体-依赖的细胞毒性(ADCC)和补体依 赖细胞毒性(CDC)。

在抗体同型(例如IgE、IgD、IgA、IgM、和IgG)中，IgG类为最丰 富的，IgG1子类显示出效应子功能的最显著程度和排列。IgG1-型抗体是 癌症免疫疗法中最常用的抗体，其中ADCC和CDC活性常常被认为是 重要的。结构上，IgG铰链区和CH2域在抗体效应子功能中担任主要的 作用。Fc区中存在的N-连接寡糖(通过铰链二聚化形成的CH2和CH3 区域)影响效应子功能。共价结合的寡糖为复合双触角型结构且为高度异 种的(参见图1和2)。Asn297中保守的N-连接糖基化位点位于每个CH2 区域。在成熟的抗体中，与Asn297连接的两个复合双触角寡糖埋在CH2 区域之间，构成与多肽骨架的广泛接触。据发现，它们的存在是抗体介 导效应子功能(例如ADCC)的要素(Lifely，M.R.，等，Glycobiology 5：813-822(1995)；Jefferis，R.，等，Immunol Rev.163：59-76(1998)；Wright， A.和Morrison，S.L.，supra)。

这些异种的寡糖包含作为末端糖的占优势的唾液酸、岩藻糖、半乳 糖和GlcNAc残基(Raju，T.S.，等.Glycobiology 2000.10(5)：477-86)。已 经显示出这些末端糖中的一些例如暴露的半乳糖、核心岩藻糖和二等分 GlcNAc的残基，影响ADCC活性、CDC活性，也影响抗体对多种配体 包括Clq补体蛋白质的结合(Presta L.2003.Curr Opin Struct Biol. 13(4)：519-25)。虽然Fc中存在的多数N-连接寡糖本性为复合双触角的， 它们没有被唾液酸化至显著的程度(Idusogie EE，等.2000.J Immunol. 15：164(8)：4178-84)。