[发明专利]色氨酸转运蛋白基因及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及色氨酸转运蛋白基因及其用途，特别是涉及控制色氨酸同化能力的酿造酵母、用该酵母制造的酒类、其制造方法等。更具体而言，本发明涉及通过控制酿造酵母的编码色氨酸转运蛋白Tat2p的基因TAT2、特别是啤酒酵母的特征性nonScTAT2基因的表达量来控制色氨酸同化能力的酵母，以及使用该酵母的酒类的制造方法等。

背景技术

众所周知，氨基酸是酒类的重要呈味成分，是左右品质的重要因素。因此，结合要达到的酒质来控制氨基酸的量，在新品种开发中非常重要。

但是，由于氨基酸在发酵中作为氮源被酵母同化，因而难以控制发酵结束时的氨基酸的含量。

酵母为了将细胞外的氨基酸作为氮源利用，必须将氨基酸摄入菌体内。已知酵母的细胞膜中存在的氨基酸转运蛋白参与此种氨基酸的摄取。

作为酵母的氨基酸转运蛋白，已知有底物特异性低的Gap1、底物特异性不同的多种氨基酸转运蛋白(色氨酸转运蛋白TAT2、精氨酸转运蛋白Can1、脯氨酸转运蛋白Put4等(Mol Cell Biol.14：6597-6606，1994、Curr Genet 36：317-328，1999))。

迄今为止，已报道了以下实例，为控制酒类中的氨基酸含量，使用与氨基酸摄取有关的基因(gap1，shr3，can1，put4，uga4)发生突变的酵母(日本特开2001-321159号公报)，以及使支链氨基酸转运蛋白BAP2高表达的例子(日本特开2000-316559号公报)。

发明内容

鉴于上述情况，为了改变酒中的氨基酸组成，制造具有特殊品质的酒类，期望得到氨基酸的同化能力受到控制的酵母。

本发明者为了解决上述课题进行了潜心研究，结果从啤酒酵母中成功地鉴定并分离出编码比已知蛋白质更有效的色氨酸转运蛋白的基因。另外，制作了将得到的基因导入酵母并使其表达的转化酵母，证实能控制色氨酸的同化能力，从而完成了本发明。

即，本发明涉及啤酒酵母中特征性存在的新型色氨酸转运蛋白基因、该基因编码的蛋白质、该基因的表达得到调节的转化酵母、通过使用该基因的表达得到调节的酵母来制造酒类的方法等。具体而言，本发明提供如下所示的多核苷酸、含有该多核苷酸的载体、导入了该载体的转化酵母、使用该转化酵母的酒类的制造方法等。

(1)多核苷酸，其选自由下述(a)～(f)组成的组，

(a)多核苷酸，其含有由序列号1的碱基序列组成的多核苷酸；

(b)多核苷酸，其含有编码由序列号2的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸；

(c)多核苷酸，其含有编码由在序列号2的氨基酸序列中缺失、取代、插入和/或添加1个或多个氨基酸后的氨基酸序列组成且具有色氨酸转运蛋白活性的蛋白质的多核苷酸；

(d)多核苷酸，其含有编码具有与序列号2的氨基酸序列有60％以上同一性的氨基酸序列且具有色氨酸转运蛋白活性的蛋白质的多核苷酸；

(e)多核苷酸，其含有与由序列号1的碱基序列的互补碱基序列组成的多核苷酸在严谨条件下杂交且编码具有色氨酸转运蛋白活性的蛋白质的多核苷酸；以及

(f)多核苷酸，其含有与编码由序列号2的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸的碱基序列的互补碱基序列所组成的多核苷酸在严谨条件下杂交且编码具有色氨酸转运蛋白活性的蛋白质的多核苷酸。

(2)上述(1)所述的多核苷酸，其是选自由下述(g)～(i)组成的组，

(g)多核苷酸，其含有编码由序列号2的氨基酸序列或由在序列号2的氨基酸序列中缺失、取代、插入和/或添加1～10个氨基酸后的氨基酸序列组成且具有色氨酸转运蛋白活性的蛋白质的多核苷酸；

(h)多核苷酸，其含有编码具有与序列号2的氨基酸序列有90％以上同一性的氨基酸序列且具有色氨酸转运蛋白活性的蛋白质的多核苷酸；以及

(i)多核苷酸，其含有由序列号1的碱基序列组成的多核苷酸、或含有与序列号1的碱基序列的互补碱基序列所组成的多核苷酸在高严谨条件下杂交且编码具有色氨酸转运蛋白活性的蛋白质的多核苷酸。

(3)上述(1)所述的多核苷酸，其含有由序列号1的碱基序列组成的多核苷酸。

(4)上述(1)所述的多核苷酸，其含有编码由序列号2的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸。

(5)上述(1)～(4)任一项所述的多核苷酸，其是DNA。

(6)多核苷酸，其是选自由下述(j)～(m)组成的组，

(j)多核苷酸，其编码具有与上述(5)所述的多核苷酸(DNA)的转录产物互补的碱基序列的RNA；