[发明专利]使低温发酵性及/或耐冷冻性增强的基因及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及使低温发酵性及/或耐冷冻性(以下称“低温性能”)增强的基因及其用途，特别涉及低温性能良好的酿造酵母、使用该酵母制造的酒类及其制造方法等。更加具体地说，本发明涉及通过提高酿造酵母的编码使低温性能增强的蛋白质Dlt1p的基因DLT1、特别是啤酒酵母的特征基因nonScDLT1的表达量而使低温性能提高的酵母，使用该酵母的酒类的制造方法等。

背景技术

储藏啤酒(ラガ一ビ一ル)储藏的特征是，其为通过低温(10-15℃)发酵、无杂味、口感清爽的啤酒。制造储藏啤酒时使用的下面发酵酵母具有良好的低温发酵性，但与低温发酵性相关的基因尚不明确。

同样，对于经过低温发酵的清酒，已知在酯类等香气成分的生成酶的活性维持、香气成分的分解酶的活性降低、香气成分底物的增加等方面，低温均具有重要的作用。

日本再表97/02444号公报中报道了，通过与具有发酵能力的低温敏感性的突变的互补基因的表达，低温发酵能力得到提高的例子。还报道了与低温增殖相关的基因LTG3(DLT1)(清酒酵母的研究90年代的研究、清酒酵母·麸研究会编p103-107，2003。日语原文：清酒酵母の研究90年代の研究、清酒酵母·麹研究会编p 103-107、2003)。

另一方面，报道了使面包酵母的耐冷冻性增强的基因YLR023c和YMR126c(DLT1)(日本特开2003-144137号公报)。

发明内容

鉴于上述状况，要制造低温下香味良好的酒类，期望有低温发酵性良好的酵母。并且，如果通过冷冻能够使酵母得到长期稳定地保存，将会提高生产率，所以也期望有耐冷冻性良好的酵母。

本发明者为了解决上述课题不断精心研究，结果从啤酒酵母中成功鉴定、分离出编码比已知的蛋白质更有效果的使低温性能增强的蛋白质的基因。并且，将得到的基因导入酵母内并使其表达，制作转化酵母，确认低温性能得到增强，从而完成了本发明。

即本发明涉及啤酒酵母中特征性存在的使低温性能增强的新型基因、该基因编码的蛋白质、该基因的表达受到调节的转化酵母、通过使用该基因的表达受到调节的酵母来制造酒类的方法等。本发明具体提供下述多核苷酸、含有该多核苷酸的载体、导入该载体的转化酵母、使用该转化酵母的酒类的制造方法等。

(1)从下述由(a)～(f)组成的组中选择的多核苷酸，

(a)多核苷酸，其含有由序列号1的碱基序列组成的多核苷酸；

(b)多核苷酸，其含有编码蛋白质的多核苷酸，所述蛋白质由序列号2的氨基酸序列组成；

(c)多核苷酸，其含有编码蛋白质的多核苷酸，所述蛋白质由在序列号2的氨基酸序列中缺失、取代、插入及/或添加1个或多个氨基酸后的氨基酸序列组成，且具有使低温性能增强的活性；

(d)多核苷酸，其含有编码蛋白质的多核苷酸，所述蛋白质具有与序列号2的氨基酸序列有60％以上同一性的氨基酸序列，且具有使低温性能增强的活性；

(e)多核苷酸，其含有与由序列号1的碱基序列的互补碱基序列组成的多核苷酸在严谨条件下杂交且编码具有使低温性能增强的活性的蛋白质的多核苷酸；以及

(f)多核苷酸，其含有与编码由序列号2的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸的碱基序列的互补碱基序列所组成的多核苷酸在严谨条件下杂交且编码具有使低温性能增强的活性的蛋白质的多核苷酸。

(2)从下述由(g)～(i)组成的组中选择的上述(1)所述的多核苷酸，

(g)多核苷酸，其含有编码蛋白质的多核苷酸，所述蛋白质由序列号2的氨基酸序列或在序列号2的氨基酸序列中缺失、取代、插入及/或添加1～10个氨基酸后的氨基酸序列组成，且具有使低温性能增强的活性；

(h)多核苷酸，其含有编码蛋白质的多核苷酸，所述蛋白质具有与序列号2的氨基酸序列有90％以上同一性的氨基酸序列，且具有使低温性能增强的活性；以及

(i)多核苷酸，其含有由序列号1的碱基序列组成的多核苷酸、或含有与序列号1的碱基序列的互补碱基序列所组成的多核苷酸在高严谨条件下杂交且编码具有使低温性能增强的活性的蛋白质的多核苷酸。

(3)如上述(1)所述的多核苷酸，其含有由序列号1的碱基序列组成的多核苷酸。

(4)如上述(1)所述的多核苷酸，其含有编码由序列号2的氨基酸序列组成的蛋白质的多核苷酸。

(5)如上述(1)～(4)中任一项所述的多核苷酸，其为DNA。

(6)蛋白质，其是由上述(1)～(5)中任一项所述的多核苷酸编码的蛋白质。